一种免疫细胞及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115820697A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211163685.2A61P35/00(2006.01)(22)申请日2022.09.23A61P15/14(2006.01)(71)申请人中国海洋大学地址266000山东省青岛市崂山区松岭路238号(72)发明人李静李明风戚欣(74)专利代理机构北京细软智谷知识产权代理有限责任公司11471专利代理师刘静荣(51)Int.Cl.C12N15/62(2006.01)C07K19/00(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/00(2006.01)权利要求书1页说明书16页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种免疫细胞及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种核酸构建物、免疫细胞及其制备方法与应用，所述的核酸构建物包括顺序连接的：胞外抗原结合区编码序列、跨膜区编码序列、胞内信号转导区编码序列组成的CAR分子编码序列，以及sGP130或其融合蛋白编码序列；sGP130或其融合蛋白编码序列和CAR分子编码序列之间由剪切肽连接，所述剪切肽包括：F2A，T2A，E2A或P2A。本发明将sGP130同时联合使用CAR‑T细胞，试验表明，本发明获得的sGP130‑HER2‑CAR‑NK92细胞高表达HER2抗体，可以用于HER2相关肿瘤的治疗。而且，免疫细胞过表达sGP130，阻断IL‑6与其受体的结合，提高了其体内的安全性，通过体外细胞毒性试验表明，sGP130‑HER2‑CAR‑NK92细胞增强了CAR‑T细胞对JIMT‑1细胞的杀伤作用的2倍左右。CN115820697ACN115820697A权利要求书1/1页1.一种核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物包括顺序连接的：胞外抗原结合区编码序列、跨膜区编码序列、胞内信号转导区编码序列，以及sGP130或其融合蛋白编码序列。2.根据权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，胞外抗原结合区编码序列，跨膜区，胞内信号转导区编码序列组成CAR分子编码序列，所述的sGP130或其融合蛋白编码序列和CAR分子编码序列之间由剪切肽连接，所述剪切肽包括：F2A，T2A，E2A或P2A。3.根据权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述胞外抗原结合区识别任意肿瘤特异性或相关性抗原，包括HER2，EphA2，GD2，EpCAM，PD‑1、PD‑L1、LeY，CEA，EGFR，GPC3，mesothelin，CD19，CD20，ASGPR1，EGFRvIII，de4EGFR，NY‑ESO‑1，MAGE4，CD19，CAIX，CD123、CD33，IL13R，LMP1，PLAC1，MUC1，MUC16；所述跨膜区和胞内信号转导区选自CD8、CD28TM+ICD、4‑1BB、DAP10、DAP12、NKG2D、DNAM1、CD3ζ中的任意一种或至少两种分子的胞内结构域组合。4.根据权利要求1‑3任一所述的核酸构建物，其特征在于，所述sGP130包含氨基酸1‑558aa，氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；优选地，所述sGP130的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。5.根据权利要求2或3所述的核酸构建物，其特征在于，所述的胞外抗原结合区编码序列前端加入了FLAG、His或HA标签，有利于检测目的基因的表达。6.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1‑5任一所述的核酸构建物。7.一种免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞含有权利要求2‑5任一所述的核酸构建物，所述免疫细胞上修饰有一种或者两种以上的CAR分子；所述免疫细胞过表达sGP130。8.根据权利要求1或2所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞选自NK细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述NK细胞包括从人体中取出的NK细胞或干细胞体外诱导的NK细胞、记忆NK细胞和NK细胞株；所述T细胞包括从人体中取出的T细胞或干细胞体外诱导的T细胞；优选地，所述T细胞为CD4+T细胞、CD8+T细胞、NKT细胞以及记忆T细胞。9.一种制备7或8所述的免疫细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括：将权利要求1‑5任一所述的核酸构建物转入免疫效应细胞中。10.一种如权利要求1‑5任一所述的核酸构建体、权利要求6所述的载体、权利要求7或8所述的免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备抑制肿瘤细胞的药物或在肿瘤细胞免疫疗法中的应用。2CN115820697A说明书1/16页一种免疫细胞及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于细胞免疫治疗技术领域，具体涉及一种免疫细胞及其制备方法和应用。背景技术[0002]免疫细胞在肿