一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107189989A(43)申请公布日2017.09.22(21)申请号201710519947.7(22)申请日2017.06.30(71)申请人贵州医科大学地址550025贵州省贵阳市贵安新区大学城贵州医科大学(72)发明人赵星何志旭欧阳伟炜龙世棋王念雪(74)专利代理机构北京联创佳为专利事务所(普通合伙)11362代理人郭防王培境(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)C12N5/0783(2010.01)A61K35/765(2015.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒，所述免疫效应细胞为CIK细胞，所述溶瘤病毒为呼肠孤病毒3型Dearing株。还公开了其制备方法和应用。本发明提供的一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒，具有更好的靶向抗肿瘤特性。Reovirus装载CIK细胞后主要存留于细胞表面并显著增强了CIK细胞的细胞毒性，CIK细胞可在体外存在有中和抗体的情况下将reovirus传递给肿瘤细胞。所得免疫效应细胞装载的溶瘤病毒可抑制肿瘤生长，促进靶向抗肿瘤效应，本发明的制备方法简单易行，操作条件温和易控制。所得免疫效应细胞装载的溶瘤病毒可在制备靶向抗肿瘤药物中应用。CN107189989ACN107189989A权利要求书1/1页1.一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒，其特征在于：所述免疫效应细胞为CIK细胞，所述溶瘤病毒为呼肠孤病毒3型Dearing株。2.根据权利要求1所述的免疫效应细胞装载的溶瘤病毒，其特征在于：装载了呼肠孤病毒的CIK细胞密度为1×106～2×106细胞/ml密度。3.如权利要求1或2所述的免疫效应细胞装载的溶瘤病毒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：收集体外活化扩增培养的CIK细胞，用PBS洗细胞，通过GT-T551无血清培养基调整CIK细胞密度，随后取呼肠孤病毒与CIK细胞在4℃下孵育，PBS洗去未结合的病毒，GT-T551无血清培养基重悬后，即得。4.根据权利要求3所述的免疫效应细胞装载的溶瘤病毒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：收集体外活化扩增培养至第14～16天的CIK细胞，用PBS洗细胞2～4次，通过GT-T551无血清培养基调整CIK细胞密度为1×106～5×106细胞/mL密度，随后取呼肠孤病毒，以1～10pfu/cell的滴度与CIK细胞在4℃下孵育2～4h，PBS洗去未结合的病毒，GT-T551无血清培养基重悬后，即得。5.根据权利要求4所述的免疫效应细胞装载的溶瘤病毒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：收集体外活化扩增培养至第14～16天的CIK细胞，用PBS洗细胞3次，通过GT-T551无血清培养基调整CIK细胞密度为3×106细胞/mL密度，随后取呼肠孤病毒，以5pfu/cell的滴度与CIK细胞在4℃下孵育3h，PBS洗去未结合的病毒，GT-T551无血清培养基重悬后，即得。6.如权利要求1或2所述的免疫效应细胞装载的溶瘤病毒在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。2CN107189989A说明书1/6页一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种免疫效应细胞装载的溶瘤病毒及其制备方法和应用，具体属于病毒技术领域。背景技术[0002]溶瘤病毒(oncolyticvirus，OV)是天然或经人工改造的能特异性在肿瘤细胞内大量复制并最终破坏肿瘤细胞，而对正常组织细胞无杀伤作用的一类病毒。已应用于临床研究的OV主要有腺病毒、新城疫病毒、单纯疱疹病毒-1、呼肠孤病毒(reovirus)及牛痘病毒等。目前在全球范围内注册开展的溶瘤病毒临床实验已有百余项，涉及大多数常见肿瘤类型，一系列的临床实验已完成，溶瘤病毒治疗的安全性和有效性得以证实，还取得了很多令人鼓舞的进展。reovirus是野生型溶瘤病毒，其广泛存在于人类呼吸道和消化道中，绝大多数人在感染病毒后是无症状的，少数人感染后可引起胃肠道和上呼吸道疾病，检测发现几乎所有成年人体内均存在有该病毒的抗体。加拿大OncolyticsBiotech公司已将野生型reovirus(Type3dearing)开发为专利产品并开展了30余项临床实验，其中对头颈部鳞状细胞癌的治疗已进入III期临床实验。在瘤体内注射的I/II期临床研究中已观察到了良好的安全性和耐受性，在单独静脉使用reovirus的I期临床研究也证实了应用的安全性，但疗效有限，探其原因主要是中和抗体的出现。因而，为克服传统溶瘤病毒给药方法的不足，人们逐渐开发出以细胞为运载工具的新型给药方式，即将病毒