辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104232624104232624A(43)申请公布日2014.12.24(21)申请号201310230937.3(22)申请日2013.06.09(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人蒲娟刘金华魏延迪俞晨芳裴星瑶齐鲁张谞霄(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书9页说明书9页序列表2页序列表2页附图2页附图2页(54)发明名称辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用(57)摘要本发明公开了一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用。本发明提供的特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。本发明还保护一种引物组合物，由引物对甲和所述特异引物对组成；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成。本发明提供的特异引物对可鉴定鸡传染性支气管炎病毒，本发明提供的引物组合物结合双重RT-PCR可同时鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒，均具有灵敏度高、特异性强、普适性强、所需时间短、成本低等优点，可以对多种临床样本进行检测，操作简单、容易推广，便于基层操作和应用。CN104232624ACN104236ACN104232624A权利要求书1/1页1.特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。2.权利要求1所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。3.一种试剂盒，包括权利要求1所述特异引物对；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。4.一种辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测病毒为候选的鸡传染性支气管炎病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测病毒为候选的非鸡传染性支气管炎病毒。5.一种辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒的方法，包括如下步骤：以待测样本的cDNA为模板，用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测样本疑似含有鸡传染性支气管炎病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测样本疑似不含有鸡传染性支气管炎病毒。6.引物组合物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成；所述引物对乙由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。7.权利要求6所述引物组合物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下（c）或（d）：（c）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒；（d）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒。8.一种试剂盒，包括权利要求6所述引物组合物；所述试剂盒的用途为如下（c）或（d）：（c）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒；（d）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒。9.权利要求6所述引物组合物对在辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒中的应用。10.权利要求6所述引物组合物对在辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒中的应用。2CN104232624A说明书1/9页辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用。背景技术[0002]H9亚型禽流感和鸡传染性支气管炎是目前危害我国养禽业的主要疫病。H9亚型禽流感病毒可以感染多种禽和哺乳动物，并可导致禽类发病死亡，严重影响养禽业的健康发展。鸡传染性支气管炎也是一种危害我国养禽业的重要传染病，病鸡主要表现呼吸道症状。临床上两病症状相似，两种病毒感染均导致肉鸡生长缓慢和蛋鸡产蛋率下降，给养禽业造成严重的经济损失。此外，H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒抗原特性的变异，导致常规血清学方法无法检出流行毒株。因此，建立一种快速有效的鉴别两种病毒流行毒株的诊断方法，对于及时采取有效控制措