一种鉴定鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的引物组合及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105567877A(43)申请公布日2016.05.11(21)申请号201610132391.1C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)(22)申请日2016.03.09(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市西乡塘区友爱北路51号兽医研究所(72)发明人谢芝勋奉彬邓显文张艳芳黄娇玲王盛范晴谢志勤黄莉谢丽基曾婷婷罗思思刘加波(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅何叶喧(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)权利要求书3页说明书9页C12Q1/68(2006.01)序列表3页附图2页(54)发明名称一种鉴定鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的引物组合及其应用(57)摘要本发明公开了一种鉴定鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的引物组合及其应用。本发明的引物组合由引物对I和引物对II组成。引物对I由引物ChPV-F和ChPV-R组成，分别如序列表1、2所示。引物对II由引物ARV-F和ARV-R组成，分别如序列表3、4所示。本发明还保护所述引物组合在鉴别鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒中的应用、鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒中的应用、鉴定待测样本是否感染了鸡细小病毒和/或禽呼肠孤病毒中的应用。本发明建立的二重PCR可用于快速检测鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。CN105567877ACN105567877A权利要求书1/3页1.引物组合，由引物对I和引物对II组成；所述引物对I由引物ChPV-F和引物ChPV-R组成；所述引物ChPV-F为如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物ChPV-R为如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对II由引物ARV-F和引物ARV-R组成；所述引物ARV-F为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物ARV-R为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述引物组合的应用，为如下(c1)至(c6)中的任意一种：(c1)鉴别鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒；(c2)制备用于鉴别鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的试剂盒；(c3)鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒；(c4)制备用于鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒的试剂盒；(c5)鉴定待测样本是否感染了鸡细小病毒和/或禽呼肠孤病毒；(c6)制备用于鉴定待测样本是否感染了鸡细小病毒和/或禽呼肠孤病毒的试剂盒。3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒；(d2)鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了鸡细小病毒和/或禽呼肠孤病毒。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。5.一种鉴别待测病毒为鸡细小病毒还是禽呼肠孤病毒的方法，包括如下步骤：(1)将待测病毒的基因组DNA和所述待测病毒的cDNA混合，得到混合样本；(2)以步骤(1)得到的混合样本为模板，采用权利要求1所述引物组合进行PCR扩增，如果采用所述引物对I可以实现对所述模板的特异性扩增、待测病毒为鸡细小病毒，如果采用所述引物对II可以实现对所述模板的特异性扩增、待测病毒为禽呼肠孤病毒。6.一种鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒的方法，包括如下步骤：(1)将待测病毒的基因组DNA和所述待测病毒的cDNA混合，得到混合样本；2CN105567877A权利要求书2/3页(2)以步骤(1)得到的混合样本为模板，采用权利要求1所述引物组合进行PCR扩增，如果采用所述引物对I可以实现对所述模板的特异性扩增、待测病毒为或候选为鸡细小病毒，如果采用所述引物对II可以实现对所述模板的特异性扩增、待测病毒为或候选为禽呼肠孤病毒，如果采用所述引物对I不能实现对所述模板的特异性扩增且采用所述引物对II不能实现对所述模板的特异性扩增、待测病毒为或候选为非鸡细小病毒且非禽呼肠孤病毒的病毒。7.一种鉴定