H9亚型禽流感病毒和H6亚型禽流感病毒的二重RT-PCR试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105861757A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610430961.5(22)申请日2016.06.17(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋李丹李孟谢志勤罗思思谢丽基黄莉范晴黄娇玲(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅何叶喧(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书4页说明书11页序列表4页附图1页(54)发明名称H9亚型禽流感病毒和H6亚型禽流感病毒的二重RT-PCR试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组。利用本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组建立的二重RT-PCR，可准确鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒，且特异性好，灵敏度高，对H9亚型禽流感病毒和H6亚型AIV的最小检出限均达到5×104拷贝。因此，本发明所提供的引物对组可同时检测H9亚型AIV和H6亚型AIV，具有重要的应用价值。CN105861757ACN105861757A权利要求书1/4页1.用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组，由特异引物对甲和特异引物对乙组成；所述特异引物对甲，由用于扩增特异DNA片段甲的两条引物组成；所述特异DNA片段甲中具有H9亚型禽流感病毒基因组中引物H9-F和引物H9-R组成的引物对的靶序列；所述引物H9-F为如下a1)或a2)：a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；所述引物H9-R为如下a3)或a4)：a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；所述特异引物对乙，由用于扩增特异DNA片段乙的两条引物组成；所述特异DNA片段乙中具有H6亚型禽流感病毒基因组中引物H6-F和引物H6-R组成的引物对的靶序列；所述引物H6-F为如下b1)或b2)：b1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物H9-R为如下b3)或b4)：b3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子。2.如权利要求1所述的引物对组，其特征在于：所述特异引物对甲由所述引物H9-F和所述引物H9-R组成；所述特异引物对乙由所述引物H6-F和所述引物H6-R组成。3.权利要求1或2所述引物对组的应用，为如下c1)或c2)或c3)或c4)或c5)或c6)或c7)：c1)制备用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的试剂盒；c2)鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒；c3)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为候选的H9亚型禽流感病毒或候选的H6亚型禽流感病毒；c4)制备用于鉴别H9亚型禽流感病毒和H6亚型禽流感病毒的试剂盒；c5)鉴别H9亚型禽流感病毒和H6亚型禽流感病毒；c6)制备用于检测待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的试剂盒；c7)检测待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒。4.含有权利要求1或2所述引物对组的试剂盒；所述试剂盒的功能为如下c2)或c3)或c5)或c7)：c2)鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒；c3)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为候选的H9亚型禽流感病毒或候选的H6亚型禽流感病毒；2CN105861757A权利要求书2/4页c5)鉴别H9亚型禽流感病毒和H6亚型禽流感病毒；c7)检测待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒。5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)：(Ⅰ)权利要求1或2所述引物对组中各引物对的各条引物分别单独包装；(Ⅱ)权利要求1或2所述引物对组中各引物对的各条引物按比例混合在一起。6.一种鉴定待测RNA病毒是否为候选的H9亚型禽流感病毒或H6亚型禽流感病毒的方法，包括如下步骤q1)或q2)：q1)提取待测RNA病毒的RNA，采用权利要求1或2所述引物对组进行RT-PCR扩增，得到RT-PCR扩增产物，然后进行如下判断：如果所述RT-PCR扩增产物中含有