一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106620685A(43)申请公布日2017.05.10(21)申请号201611251490.8A61P31/04(2006.01)(22)申请日2016.12.30A61P11/02(2006.01)A61P11/00(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20166072016.11.01(71)申请人青岛易邦生物工程有限公司地址266009山东省青岛市红岛经济开发区岙东南路21号(72)发明人张恒郭莉莉张会范根成杜元钊(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.A61K39/02(2006.01)A61K39/39(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗(57)摘要本发明提供一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗，具体涉及分离培养及Bb基因特异性引物PCR扩增和测序鉴定一种兔支气管败血波氏杆菌(QDBb01株，保藏号为CCTCCM2016607)，通过对该兔支气管败血波氏杆菌外膜蛋白(OMP)的提取及纯化出蛋白分子量＞40kDa的抗原蛋白，然后采用Bradford蛋白含量测定法测出蛋白浓度并稀释至150ug/ml，再与氢氧化铝胶佐剂按照体积比1:4乳化制备出亚单位疫苗(成品相当于30ug/ml)，按照1ml/只剂量皮下注射免疫体重1.5kg左右的家兔，免后14日，用兔支气管败血波5氏杆菌QDBb01株(LD50为4.8×10CFU)按照100LD50进行耳静脉注射攻毒，攻毒后观察7日，统计家兔的攻毒保护率为10/10。CN106620685ACN106620685A权利要求书1/1页1.一种兔支气管败血波氏杆菌，其特征在于，所述的兔支气管败血波氏杆菌的保藏编号为CCTCCM2016607。2.权利要求1所述的兔支气管败血波氏杆菌在制备疫苗中的应用。3.一种灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗中的抗原为灭活的权利要求1所述的兔支气管败血波氏杆菌。4.一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗，其特征在于，所述的亚单位疫苗的抗原是从权利要求1所述的兔支气管败血波氏杆菌中提取的，具有免疫原性的蛋白。5.如权利要求4所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的蛋白，是分子量不小于40kDa的蛋白。6.如权利要求4或5所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的蛋白，其提取方法如下：将权利要求1所述的兔支气管败血波氏杆菌的菌体破碎后，离心去除未破碎掉的细菌菌体和较重的细菌细胞内细胞器；将上清液高速离心后获得沉淀；用缓冲液溶解沉淀后，室温孵育后；再进行高速离心；沉淀溶解以后，用能够截留蛋白分子量在40kDa以上的半透膜透析掉小分子蛋白，透析液中的蛋白即为目的蛋白。7.如权利要求4所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的亚单位疫苗中的疫苗佐剂为氢氧化铝胶佐剂。2CN106620685A说明书1/4页一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗技术领域[0001]本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗。背景技术[0002]兔支气管败血波氏杆菌病在秋冬季节和早春多发。主要通过空气传播，经呼吸道而感染。幼兔发病率高，并且有死亡病例。成年兔发病较少。此菌在群养兔污染为64.4％，散养兔为20％。在自然条件下，多种哺乳动物上呼吸道中都有本菌寄生，常引起慢性呼吸道病的相互感染。尤其在天气突变，兔的抵抗力下降，兔舍卫生不好，空气污浊等情况下，均可引起本病发生。本病的潜伏期7～10d。成年兔表现鼻炎和支气管炎。有多量的浆液性、黏液性鼻液流出。鼻炎长期不愈，鼻腔流出黏液性或脓性分泌物，打喷嚏，呼吸困难，不食，消瘦等。仔兔多呈急性经过，初期刚见鼻炎病状后，即表现呼吸困难，迅速死亡，病程2～3d。本病的主要病变为鼻炎、化脓性鼻气管炎、化脓性支气管肺炎，个别的出现败血病变化。鼻腔、气管黏膜充血、水肿。鼻腔内有浆液性、黏液性或黏液脓性分泌物。在肺门支气管周围到肺的边缘见有支气管肺炎病灶。病变多见于心叶、尖叶，严重的病例，波及全肺叶。病变部隆起、坚硬，呈暗红色，褐色，进而为灰黄色。有些病例肺上有大小不等的脓疮。严重的占肺部的90％以上。有的肝脏表面有黄豆至蚕豆大的脓疮。脓疮破后可见黏稠的奶油状乳白色的脓汁。还见有心包炎、胸膜炎、胸腔积脓及肌肉脓肿等。[0003]兔支气管败血波氏杆菌病主要采用生物安全措施和疫苗预防接种。其中生物安全措施主要包括：加强饲养管理，改善饲养环境，做好防疫工作；兔场最好坚持自繁自养；对新引进的兔，必须隔离观察1个月以上，经细菌学与血清学检查为阴性者方可入群。本病常与巴氏杆菌混合感染，兔群一旦发病，必须查明原因，消除外界刺激因素，隔离感染