一种重组支气管败血波氏杆菌菌株、疫苗及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103421728A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103421728103421728A(43)申请公布日2013.12.04(21)申请号201210205663.8A61K39/116(2006.01)(22)申请日2012.06.20A61K39/102(2006.01)A61K39/10(2006.01)(83)生物保藏信息A61P31/04(2006.01)CCTCCNO：M20122062012.06.07C12R1/01(2006.01)(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人吴斌罗芬陈焕春吴磊曾松林侯康炜汤细彪余腾张佳思(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人张红兵(51)Int.Cl.权利要求书1页权利要求书1页说明书12页说明书12页C12N1/21(2006.01)序列表6页序列表6页附图6页附图6页(54)发明名称一种重组支气管败血波氏杆菌菌株、疫苗及应用(57)摘要本发明属于动物细菌学和基因工程疫苗制备技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段的重组支气管败血波氏杆菌菌株、含有该重组菌的疫苗，其制备方法与应用。本发明得到一株不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段重组支气管败血波氏杆菌QH0814ΔaroA/toxA-N，该菌株缺失了支气管败血波氏杆菌的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶aroA基因，该菌株含有猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段。本发明还公开了该重组菌的制备方法及疫苗的应用。本发明的基因工程疫苗可以刺激猪产生抵抗猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌野毒株的保护性免疫反应，能有效防止猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌的双重感染。CN103421728ACN1034278ACN103421728A权利要求书1/1页1.一种对猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌具有双重免疫保护力的，表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段重组的支气管败血波氏杆菌QH0814ΔaroA/toxA-N，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2012206。2.如权利要求1所述的支气管败血波氏杆菌，其特征在于：该菌缺失支气管败血波氏杆菌对芳香族氨基酸代谢所必须的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶aroA基因，其核苷酸序列如序列表SEQIDNO：2所示，并含有能在该菌基因组中稳定表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段的蛋白，其核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所示。3.包含权利要求1或2所述的支气管败血波氏杆菌基因工程疫苗。4.权利要求1或2所述的支气管败血波氏杆菌在制备猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌病疫苗中的应用。5.权利要求3所述的基因工程疫苗在防治猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌病中的应用。2CN103421728A说明书1/12页一种重组支气管败血波氏杆菌菌株、疫苗及应用技术领域[0001]本发明属于动物细菌基因工程技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段重组支气管败血波氏杆菌活疫苗菌株的构建、含有该菌株的疫苗，其制备方法与应用。背景技术[0002]支气管败血波氏杆菌（BordetellaBronchiseptica，Bb）是一种革兰氏阴性菌，其宿主范围广泛，大多数哺乳动物和鸟类都可以被感染。该菌是引起猪萎缩性鼻炎（AtropticRhinitis,AR）的主要病原菌之一，单独的Bb常常引起猪只的隐性感染，发病猪临床表现为生长缓慢，育肥延迟，极大地降低了饲料报酬和生产效率；而Bb和产毒素多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocida,Pm）共同作用引起的猪萎缩性鼻炎，在临床上以出现鼻炎、鼻甲骨萎缩和生长性能下降为特征。Bb可通过飞沫传播，并经动物的呼吸运动而侵入机体，该菌侵入机体后，能够破坏局部的纤毛或上皮，同时Bb分泌的各种毒素可引起机体呼吸道粘膜上皮细胞发炎、增生和纤毛脱落。如果机体的鼻粘膜出现急性炎症的继续发展，则常有部分粘膜上皮受损脱落，进而鼻粘膜的屏障作用遭到破坏，大量细菌及其毒素就会趁机迅速进入粘膜下组织，造成骨组织明显损伤，引起猪鼻甲骨病变。同时，Bb粘膜上皮细胞受损脱落后可为其它呼吸道病原菌的侵入提供了条件，造成其它多种病原的继发感染，对鼻腔和整个呼吸道造成更严重的损伤（斯特劳等．猪病学[M].赵德明等译．第8版．北京：中国农业大学出版社，2008,369-406.）。从而增加猪群呼吸道疾病的发病率和严重程度，造成严重经济损失(Strawetal.,2000;Karen,2000;Bo