样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115932237A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210431621.X(22)申请日2022.04.22(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市江干区石桥路198号(72)发明人叶伟成云涛张存倪征陈柳华炯钢朱寅初余斌(74)专利代理机构杭州合信专利代理事务所(普通合伙)33337专利代理师黄平英(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表3页附图1页(54)发明名称样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用(57)摘要本申请公开了一种样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：5‑15％脱脂奶粉；5～15％胎牛血清；余量为PBST水溶液。本申请的样品稀释液应用于间接ELISA检测试剂盒，能够有效降低待测样品自身背景的影响，提高检测的特异性和灵敏性。本申请通过间接ELISA检测试剂盒构建了检测番鸭细小病毒抗体的方法，该方法特异性好、灵敏度高，能够实现样品的快速检测。CN115932237ACN115932237A权利要求书1/2页1.一种样品稀释液，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：脱脂奶粉5‑15％；胎牛血清5～15％；余量为PBST水溶液。2.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：脱脂奶粉5‑10％；胎牛血清5‑10％；余量为PBST水溶液。3.一种包含如权利要求1～2任一所述样品稀释液的间接ELISA检测试剂盒。4.番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，包括番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体和样品稀释液，其特征在于，所述番鸭细小病毒VP3蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示；所述样品稀释液为如权利要求1～2任一所述的样品稀释液。5.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：脱脂奶粉10％；胎牛血清10％；余量为PBST水溶液。6.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体的制备方法包括以下步骤：利用所述番鸭细小病毒VP3蛋白包被载体；采用封闭液处理所述载体的包被面；所述番鸭细小病毒VP3蛋白的使用量为0.5～1μg；所述封闭液为5‑10wt％脱脂奶粉。7.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照、阴性对照、酶标二抗、底物缓冲溶液、底物溶液以及终止液。8.根据权利要求7所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为番鸭细小病毒标准阳性血清；所述阴性对照为番鸭细小病毒标准阴性血清；所述酶标二抗为HRP标记的兔抗番鸭IgG；所述底物缓冲溶液为含有过氧化氢的柠檬酸‑磷酸氢二钠水溶液，其中过氧化氢的浓度为1.11g/L，柠檬酸的浓度为0.025mol/L，磷酸氢二钠的浓度为0.05mol/L；所述底物溶液为0.01g的3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶于1mLNN'‑二甲基乙酰胺制得；所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液。9.一种检测番鸭细小病毒抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S100：利用权利要求1或2任一所述的样品稀释液稀释待测样品、阳性对照和阴性对照，向番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体的孔内分别加入稀释后的待测样品、阳性对照和阴性对照，并置于37℃孵育1h，孵育结束后，对载体进行清洗并干燥；S200：向各孔内加入酶标二抗的PBST溶液后，将载体置于37℃下孵育1h，孵育结束后，2CN115932237A权利要求书2/2页对载体进行清洗并干燥；S300：向各孔内加入经底物缓冲溶液稀释后的底物溶液，避光显色5‑10分钟后，加入终止液；S400：利用酶标仪检测各孔的吸收值OD450；S500：根据吸收值OD450判断待测样品是否为阳性；所述待测样品的稀释倍数为50‑100。3CN115932237A说明书1/9页样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用技术领域[0001]本申请涉及病毒抗体检测技术领域，特别是涉及一种样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用。背景技术[0002]番鸭细小病毒病为由番鸭细小病毒(MuscovyDuckParvovirus,MDPV)引起的雏番鸭以喘气、腹泻、软脚、胰坏死和出血及纤维素性肠炎为主要特征的急性败血型传染病，因其主要侵害3周龄内雏番鸭，故又称“三周病”。该病传染性极