一种敲除基因的重组大肠杆菌及其构建方法.pdf
书生****萌哒
亲,该文档总共11页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~
相关资料
一种敲除基因的重组大肠杆菌及其构建方法.pdf
一种敲除基因的重组大肠杆菌,所述大肠杆菌经过基因敲除处理且包含有基因重组质粒,所述基因敲除的基因为adhE、ptsG、Crr、ldhA、pflB、pta、poxB、acka或arcA中的一种或多种。本发明所述的大肠杆菌经过基因敲除处理且包含有基因重组质粒利用,基因敲除和基因重组质粒二者协同作用有效提高了丁二酸的产率,具体的,本发明利用Crispr技术敲除大肠杆菌中ptsG和crr基因减少前提物质烯醇式丙酮酸的消耗,敲除大肠杆菌中ldhA、pflB、pta、poxB、acka和arcA基因减少副产物乳酸、乙
双基因敲除重组红球菌、构建方法及其应用.pdf
本发明公开了一种构建双基因敲除的重组红球菌的方法,包括:(1)根据红球菌的腈水合酶基因序列,设计引物以分别扩增腈水合酶基因的上游序列和下游序列,获得腈水合酶基因的上游片段和下游片段;(2)将腈水合酶基因的上游片段和下游片段插入到自杀质粒中,获得重组自杀质粒,自杀质粒携带卡那霉素抗性基因和蔗糖果聚糖酶基因;(3)利用重组自杀质粒转化敲除了酰胺酶基因的重组红球菌的感受态细胞,获得双基因敲除的重组红球菌,其中包括,通过卡那霉素抗性进行第一轮筛选,获得第一重组菌落,通过蔗糖平板对第一重组菌落进行第二轮筛选。还公开
一种重组大肠杆菌及其构建方法.pdf
本发明公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法,所述重组大肠杆菌包含有基因重组质粒,所述基因重组质粒为pJUN‑galp‑glk、pACYC‑cgmdh‑ppc或pRSF‑pck中的一种或多种。本发明的pACYC‑cgmdh‑ppc和pRSF‑pck质粒通过过表达大肠杆菌来源的ppc基因和pck基因,强化了PEP向草酰乙酸(OAA)的代谢;同时过表达了谷氨酸棒杆菌来源的mdh基因,使得OAA向苹果酸(MAL)的转化得到增强。这一系列操作使得逆TCA循环得到了强化。pJUN‑galp‑glk质粒引入外源葡萄糖转运
一种重组大肠杆菌及其构建方法与应用.pdf
本发明公开了一种重组大肠杆菌,其导入了吩嗪‑1‑羧酸合成基因。还公开了重组大肠杆菌的构建方法及其在制备丁二酸中的应用。重组菌株E.coli‑phz丁二酸产量及转化率明显高于原始菌株E.coliK12(△ldhA,△pflB,△ptsG),以富马酸为碳源,和原始菌株E.coliK12(△ldhA,△pflB,△ptsG)相比,重组菌株E.coli‑phz的丁二酸产量提高了68%;以葡萄糖为碳源,和原始菌株E.coliK12(△ldhA,△pflB,△ptsG)相比,重组菌株E.coli‑phz的质量收
一种敲除ITGB3基因的细胞及其构建方法.pdf
本发明提供一种敲除ITGB3的细胞的构建方法,包括:1)基于ITGB3基因的外显子序列选择若干靶点;2)针对所述靶点序列设计并合成对应的sgRNA单链序列对;3)将所述sgRNA单链序列对退火复性处理后插入到线性化载体,然后将所述线性化载体转染到靶细胞中;4)经筛选和鉴定,得到ITGB3敲除的细胞。本发明还提供了基于所述构建方法得到的敲除ITGB3的细胞。本发明提供的敲除ITGB3的细胞为在细胞、动物和分子水平上研究ITGB3异常表达与骨肉瘤耐药的关联提供了良好的细胞模型。