一种重组杆状病毒载体及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115976107A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202210956683.2(22)申请日2022.08.10(71)申请人江苏科技大学地址212003江苏省镇江市京口区梦溪路2号(72)发明人王梅仙陈艳花蒋艳红沈兴家朱娟唐顺明(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师王艳(51)Int.Cl.C12N15/866(2006.01)C12N15/12(2006.01)C12N5/10(2006.01)A01K67/033(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种重组杆状病毒载体及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种重组杆状病毒载体，重组杆状病毒载体包括p10启动子、EGFP核酸序列、pH启动子、Bmp53核酸序列；本发明还提供了该重组杆状病毒载体构建方法及应用。本发明构建的重组杆状病毒载体可以显著提高Bmp53基因在家蚕中的表达量，同时通过将Bmp53基因与绿色荧光基因EGFP基因共表达，使Bmp53基因的表达可视化，便于研究观察。CN115976107ACN115976107A权利要求书1/1页1.一种重组杆状病毒载体，其特征在于，所述重组杆状病毒载体包括p10启动子、EGFP核酸序列、pH启动子和Bmp53核酸序列，所述p10启动子启动EGFP基因表达，所述pH启动子启动Bmp53基因表达。2.一种权利要求1所述的重组杆状病毒载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别设计用于家蚕Bmp53和EGFP基因片段扩增的引物；(2)通过引物扩增获得Bmp53基因片段和EGFP基因片段；(3)步骤(2)所述EGFP基因片段连接到带有启动子p10和pH的表达载体，获得重组质粒p10‑EGFP‑pH；(4)步骤(2)所述Bmp53基因片段连接到步骤(3)所述重组质粒p10‑EGFP‑pH，获得重组质粒p10‑EGFP‑pH‑Bmp53；(5)将步骤(4)所述重组质粒p10‑EGFP‑pH‑Bmp53转化DH10Bac感受态细胞，在复合抗生素平板上培养，挑取白色克隆鉴定，即得。3.根据权利要求2所述的重组杆状病毒载体的构建方法，其特征在于：步骤(1)所述用于家蚕Bmp53基因扩增的引物为：Bmp53‑F：AAGGATCCATGAAACACGAAATCATGAC；Bmp53‑R：CTAGTCTAGATTCGCTGGCATGTTTCGTCG；步骤(1)所述用于EGFP基因扩增的引物为：EGFP‑F：TCCCCCGGGATGGTGAGCAAGGGCGAG；EGFP‑R：CGGGGTACCTCACTTGTACAGCTCGTCC。4.根据权利要求3所述的重组杆状病毒载体的构建方法，其特征在于，所述用于家蚕Bmp53基因片段扩增的上游引物设有BamHI酶切位点，下游引物设有XbaI酶切位点，用于EGFP基因片段扩增的上游引物设有SmaI酶切位点，下游引物设有KpnI酶切位点。5.表达盒、重组病毒、重组细胞或重组菌，其特征在于，含有权利要求1所述的重组杆状病毒载体。6.权利要求1所述的重组杆状病毒载体、权利要求5所述的表达盒、重组病毒、重组细胞或重组菌在研究家蚕发育和变态情况中的应用。7.权利要求5所述的重组病毒在研究家蚕发育和变态情况中的应用，其特征在于，包括如下步骤，将权利要求1所述重组杆状病毒载体转染家蚕细胞，收集细胞中的病毒液感染家蚕，饲养并观察家蚕的生长发育情况。2CN115976107A说明书1/5页一种重组杆状病毒载体及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于病毒载体技术领域，尤其涉及一种重组杆状病毒载体及其构建方法和应用。背景技术[0002]从哺乳动物到低等无脊椎动物，p53的作用机制在进化上是保守的。哺乳动物p53是细胞凋亡的关键调控因子，其通过调控细胞凋亡、DNA修复、遗传稳定性、细胞周期阻滞和衰老等多种途径参与一系列应激反应，可以有效避免机体发生炎症反应。p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，是当前肿瘤分子生物学研究的热点。[0003]构建Bmp53过表达转基因细胞系和个体，研究Bmp53信号通路对于变态期组织凋亡与重塑等发育过程的调控作用，能够更好的认识家蚕变态期组织凋亡的遗传调控，同时为变态发育为主的害虫生物防治提供重要的基础信息。[0004]目前昆虫杆状病毒表达系统已广泛用于各种重组蛋白的生产。然而，还未有用于过表达家蚕Bmp53的重组杆状病毒载体。发明内容[0005]发明目的：本发明的第一目的是提供一种重组杆状病毒载体。[0006]本发明的第二目的是提供所述重组杆状病毒载体的构建方法。[0007]本发明的第三目的是提供含有所述