DNA片段、含有该片段的重组载体及其构建方法和应用.pdf
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DNA片段、含有该片段的重组载体及其构建方法和应用.pdf
本发明公开了DNA片段,由序列表中的SEQIDNO.1所示的碱基序列组成。本发明还公开了含有外源多核苷酸的重组载体,包含原始载体以及MLAA34?B7H4融合基因。本发明还公开了构建含有外源多核苷酸的重组载体的方法,利用序列表中的SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物序列扩增得到含有SEQIDNO.4所示的碱基序列的MLAA?34基因,利用序列表中的SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的引物序列扩增得到含有SEQIDNO.7所示的碱基序列的B7H4基因,以MLAA?34基因和B7H4基因为
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一种构建DNA大片段文库的方法及其应用.pdf
本发明涉及一种DNA大片段文库的构建方法及其应用。本发明提供的DNA大片段文库的构建方法用于DNA大片段文库的构建,包括将DNA大片段的两端加上具有脱氧尿苷的接头,通过酶的消化得到具有黏性末端的大片段DNA;以及将具有黏性末端的大片段DNA进行环化,得到环化大片段DNA的步骤。通过本发明的文库构建方法可以提高大片段文库的有效数据率。此外本发明通过对接头进行特殊设计,还可以为构建的大片段DNA文库提供质控点。
(完整word版)质粒构建中DNA片段与载体连接的经验.doc
在排除了其他问题后,我做了摩尔比的调整,需要做OD260的测量。不要怕浪费回收的载体和片段因为实际用量非常少,看了下面我们的实验实例就知道了。摩尔比是指载体和插入片段,在连接时的摩尔比。1比例应该在1:2-6之间(载体:片段;片段要多)。2连接体系如果是20微升,载体和片段的总质量(微克)要在0.02微克~0.2微克之间。如果是10微升,则在0.01~0.1微克之间。我一般都用到接近上限。3EDTA不能太多。否则可能影响连接酶。附加:如何计算摩尔数和微克数(用20微升的链接体系,NEB的T4DNAliga