一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109342740A(43)申请公布日2019.02.15(21)申请号201811438942.2(22)申请日2018.11.28(71)申请人必欧瀚生物技术（合肥）有限公司地址230088安徽省合肥市高新区望江西路800号合肥创新产业园D9楼一层至四层(72)发明人章西鲁江徽谢龙生刘峰(74)专利代理机构合肥天明专利事务所(普通合伙)34115代理人赵瑜金凯(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图1页(54)发明名称一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明属于体外诊断试剂免疫层析诊断技术领域，具体涉及一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括支持物，固定在支持物上的印迹膜，固定在印迹膜一端的吸水垫和另一端的结合垫，结合垫的另一端固定有样本垫，样本垫另一端固定有滤血膜；所述印迹膜上设置有包被CagaA、尿素酶和细胞空泡毒素重组抗原混合物的检测线，以及包被羊抗鼠IgG的控制线；所述结合垫喷制有偶联鼠抗人IgG的荧光乳胶微球。该试剂盒利用间接法原理结合荧光乳胶微球的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法对幽门螺旋杆菌抗体进行快速、灵敏的定量检测。CN109342740ACN109342740A权利要求书1/2页1.一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒，包括支持物（1），固定在支持物（1）上的印迹膜（2），固定在印迹膜（2）一端的吸水垫（3）和另一端的结合垫（4），结合垫（4）的另一端固定有样本垫（5），样本垫（5）另一端固定有滤血膜（6）；其特征在于：所述印迹膜（2）上设置有包被CagaA、尿素酶和细胞空泡毒素重组抗原混合物的检测线（21），以及包被羊抗鼠IgG的控制线（22）；所述结合垫（4）喷制有偶联鼠抗人IgG的荧光乳胶微球。2.根据权利要求1所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述支持物（1）为塑料板。3.根据权利要求1所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述印迹膜（2）为硝酸纤维素膜。4.根据权利要求1所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检测线（21）上包被的CagaA、尿素酶和细胞空泡毒素重组抗原的质量比为（2-3）:（0.5-1.5）:（0.5-1.5）。5.根据权利要求1所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧光乳胶微球为结合荧光标记物探针的聚苯乙烯乳胶微球。6.一种权利要求1~5任一项所述的检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备划有检测线（21）、控制线（22）的印迹膜（2），在37℃环境下干燥0.5-1.5小时；（2）制备喷制有偶联鼠抗人IgG荧光乳胶微球的结合垫（4），在37℃环境下干燥2-4小时；（3）在支持物（1）上放置步骤（1）制备的印迹膜（2），在印迹膜（2）一端设置吸水垫，另一端设置步骤（2）制备的结合垫（4），在结合垫（4）另一端设置样本垫（5），在样本垫（5）另一端设置滤血膜（6）。7.根据权利要求6所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的检测线（21）与控制线（22）需连续且粗细均匀。8.根据权利要求6所述的一种检测人幽门螺旋杆菌抗体的荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述制备喷制有偶联鼠抗人IgG荧光乳胶微球的结合垫具体包括以下顺序步骤：（21）取荧光乳胶微球加入初洗液超声混匀后转速10000-15000rpm，离心不少于15min，弃上清液；（22）依次加入活化液1和活化液2，活化10-30min，活化条件为35-40℃，100-150rpm；活化后转速10000-15000rpm，离心不少于15min，弃上清液；（23）加偶联缓冲液超声至清透后离心不少于15min，弃上清液，得偶联液；（24）加入鼠抗人IgG与偶联液混匀，偶联，反应结束后离心不少于15min；（25）加封闭液封闭，封闭结束后离心不少于15min，弃上清液；（26）加终洗液超声至清透后离心不少于15min，弃上清液；（27）加微球稀释液稀释定容；（28）将定容后的微球用微球稀释液稀释后喷在玻璃纤维素膜上，喷涂体积为8-12μL/cm；其中，初洗液为1.95g/L的吗啉乙磺酸与0.5‰的Tween-20，NaOH调pH至5.5；2CN109342740A权利要求书2/2