定量检测人附睾分泌蛋白-4的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104655858A(43)申请公布日2015.05.27(21)申请号201510107441.6(22)申请日2015.03.12(71)申请人德迈基生物技术（北京）有限公司地址100070北京市丰台区中关村科技园丰台园海鹰路8号2号楼105室(72)发明人李道锋潘文东王新华(74)专利代理机构北京市联德律师事务所11361代理人刘永全牛艳玲(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图2页(54)发明名称定量检测人附睾分泌蛋白-4的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种以荧光染料为标记物的定量检测人附睾分泌蛋白-4的荧光免疫层析试剂盒。本发明的荧光免疫层析试剂盒实现了对人附睾分泌蛋白-4的荧光定量检测，具有稳定性好、线性范围宽、特异性好、定量准确以及简单快速的优势，可同时检测全血、血清及血浆样品，并适用于各级医院。CN104655858ACN104655858A权利要求书1/2页1.一种定量检测人附睾分泌蛋白-4的荧光免疫层析试剂盒，包括扣卡(11)、荧光免疫层析试纸条和Wash缓冲液，其特征在于：扣卡(11)为荧光免疫层析试纸条的外部壳结构，包括加样孔(9)和观察窗(10)；荧光免疫层析试纸条包括样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(6)、吸水垫(7)和底板(8)，样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(6)和吸水垫(7)搭载于底板(8)之上，样品垫(1)位于加样孔(9)的下方，且连接于标记垫(2)，标记垫(2)连接于层析膜(6)，层析膜(6)连接于吸水垫(7)，层析膜(6)上固定有一条定量检测线(4)和一条质控线(5)，检测线(4)和质控线(5)位于观察窗(10)的下方；标记垫(2)上同时固定有荧光染料修饰的人附睾分泌蛋白-4特异性抗体，和荧光染料修饰的质控分子，修饰人附睾分泌蛋白-4特异性抗体的荧光染料的发射波长与修饰质控分子的荧光染料的发射波长相同，波长范围为300-1300nm；定量检测线(4)上固定有人附睾分泌蛋白-4特异性抗体，该特异性抗体所识别的抗原决定簇与固定在标记垫(2)上的荧光染料修饰的人附睾分泌蛋白-4特异性抗体所识别的抗原决定簇不同；以及质控线(5)上固定有能与质控分子特异性结合的生物分子。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光免疫层析试纸条还包括血液分离膜(3)，其设置在标记垫(2)和层析膜(6)之间，此时标记垫(2)连接于血液分离膜(3)，血液分离膜(3)连接于层析膜(6)；或者设置在样品垫(1)和标记垫(2)之间，此时样品垫(1)连接于血液分离膜(3)，血液分离膜(3)连接于标记垫(2)；或者直接与样品垫(1)合并为同一结构。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为有机荧光染料或稀土元素荧光染料，发射波长为550-800nm，优选665nm。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述层析膜、底板和扣卡在大于550nm时荧光很弱或不含有荧光剂，优选底板为白色，表面附有不干胶，且两者均不含荧光剂。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Wash缓冲液包含牛血清白蛋白、蔗糖和表面活性剂，pH值为7.0-8.0，其中，牛血清白蛋白的浓度为0.05～2％，蔗糖的浓度为1～15％，表面活性剂的浓度为0.05～2％。6.根据权利要求1所述的定量检测人附睾分泌蛋白-4的荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)：用化学交联或生物分子间特异性作用分别将荧光染料偶联到人附睾分泌蛋白-4特异性抗体和质控分子的表面，分别得到荧光染料修饰的人附睾分泌蛋白-4特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子，修饰所述质控分子的荧光染料的发射波长与修饰人附睾分泌蛋白-4特异性抗体的荧光染料的发射波长相同，波长范围为300～1300nm；步骤(2)：将步骤(1)得到的荧光染料修饰的人附睾分泌蛋白-4特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子均固定到标记垫(2)上；步骤(3)：在层析膜(6)上分别设置一条定量检测线(4)和一条质控线(5)，其中，质控线(5)上固定有能与质控分子特异性结合的生物分子，定量检测线(4)上固定有人附睾分泌蛋白-4特异性抗体，且该特异性抗体所识别的抗原决定簇与固定在标记垫(2)上的荧光染料修饰的人附睾分泌蛋白-4特异性抗体所识别的抗原决定簇不同；2CN104655858A权利要求书2/2页步骤(4)：将样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(6)、吸水垫(7)和底板(8)构建成荧光免疫层析试纸条；步骤(5)：将荧光免疫层析试纸条装卡。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括设置血液分离膜(3)的步骤，血液分离膜(3)