定量检测人甲状旁腺激素的荧光免疫层析试纸及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107255726A(43)申请公布日2017.10.17(21)申请号201710651085.3G01N33/558(2006.01)(22)申请日2017.08.02G01N33/543(2006.01)(71)申请人江苏省原子医学研究所地址214063江苏省无锡市钱荣路20号申请人无锡市江原实业技贸总公司(72)发明人范俊黄飚戴军邹贤朱利国周彬张珏张艺谢敏浩施龙顺(74)专利代理机构常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙)32231代理人刘娟娟(51)Int.Cl.G01N33/78(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/574(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称定量检测人甲状旁腺激素的荧光免疫层析试纸及其制备方法(57)摘要本发明公开一种通过定量检测人甲状旁腺激素(PTH)实现术中判断甲状旁腺组织的荧光免疫层析试纸及其制备方法，该试纸通过双抗体夹心法和荧光免疫层析技术检测人PTH，所述抗体是利用特定的抗原表位肽制备获得。本发明能够快速准确地检测待测物中的人PTH，操作简便、快速，检测范围宽、特异性高、灵敏度好。CN107255726ACN107255726A权利要求书1/2页1.一种用于定量检测待测物中人甲状旁腺激素(PTH)的荧光免疫层析试纸，其特征在于，该试纸通过双抗体夹心法和荧光免疫层析技术检测人PTH，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PTH单克隆抗体作为检测抗体，所述第一PTH单克隆抗体利用人PTH抗原表位肽(1)和(2)中的一个作为抗原制备获得；并且所述双抗体夹心法采用第二PTH单克隆抗体作为捕获抗体，所述第二单克隆抗体利用人PTH抗原表位肽(1)和(2)中的另一个作为抗原制备获得；所述人PTH抗原表位肽(1)和(2)分别为：(1)：ERVEWLRKKLQ(SEQIDNO：2)(2)：RKKEDNVLVESHEKSLGEAD(SEQIDNO：3)。2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述单克隆抗体是由PTH抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的抗原制备而得。3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述荧光微球上的荧光物质为稀土离子铕；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述试纸具有底板(1)，并且在该底板(1)上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫(4)、结合垫(5)、硝酸纤维素膜(2)、吸水纸(3)，所述结合垫(5)设置有所述标记有荧光微球的第一PTH单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜(2)包括检测带(7)和质控带(6)，所述检测带(7)固定有所述第二PTH单克隆抗体，所述质控带(6)包被有能与所述标记有荧光微球的第一PTH单克隆抗体特异性结合的抗抗体。5.根据权利要求4所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述底板(1)不具有荧光性质。6.根据权利要求4所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述抗抗体为羊抗鼠IgG多克隆抗体或兔抗鼠IgG多克隆抗体。7.一种制备根据权利要求1至6中任意一项所述的荧光免疫层析试纸的方法，其特征在于，其包括以下步骤：1)提供标记有荧光微球的第一PTH单克隆抗体；2)提供结合垫(5)，其中在所述结合垫(5)上结合有所述标记荧光微球的第一PTH单克隆抗体；3)提供硝酸纤维素膜(2)，其中在所述硝酸纤维素膜(2)上沿使用时的层析方向间隔固定第二PTH单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测带(7)和质控带(6)；4)在底板(1)上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫(4)、所述结合垫(5)、所述硝酸纤维素膜(2)、吸水纸(3)，从而制成所述荧光免疫层析试纸。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤1)包括：使用pH7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤荧光微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温反应一定时间，洗涤荧光微球，用0.05MpH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入标记抗体，室温反应2小时，加入含有10％BSA的0.05MpH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤荧光微球，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.05MpH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶至原体积，定量喷涂于结合垫上，避光35-38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备2CN107255726A权利要求书2/2页用。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在所述步骤3)中，所述检测带(7)和质控带(6)间隔3mm至8mm，所述第二PTH单克隆抗体和所述抗抗体的包被浓度分别为0.5～2mg/m