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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115932252A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210810201.2(22)申请日2022.07.11(71)申请人广东省农业科学院动物卫生研究所地址510640广东省广州市天河区五山路白石岗(72)发明人蒋智勇李春玲翟少伦蔡汝健楚品品李艳勾红潮宋帅张昆丽(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师苏运贞(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表4页附图2页(54)发明名称PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测卡;该检测卡包括PVC底板和PVC底板上依次连接的吸收垫、反应膜、结合垫和样品垫;结合垫上负载有镧系元素离子标记的重组rGP5‑M蛋白和镧系元素离子标记的羊抗鸡IgY;反应膜的检测线T上包被有重组rGP5‑M蛋白,质控线C上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。本发明可以定量检测PRRSV抗体,并与中和抗体水平具有正相关性,相关系数为0.955,具有较高的灵敏度、特异性及精密度;操作简单快速可,大幅度降低人为误差和增加检测结果的可靠性。CN115932252ACN115932252A权利要求书1/1页1.一种PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:包括PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测卡;所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测卡包括PVC底板和PVC底板上依次连接的吸收垫、反应膜、结合垫和样品垫;样品垫部分压在结合垫上,结合垫部分压在反应膜上,吸收垫部分压在反应膜上;所述的结合垫上负载有镧系元素离子标记的重组rGP5‑M蛋白和镧系元素离子标记的羊抗鸡IgY;所述的反应膜设有检测线T和质控线C,其中检测线T上包被有重组GP5‑M蛋白,质控线C上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。2.根据权利要求1所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:还包括血清稀释液和标准阳性血清中的一种或两种。3.根据权利要求2所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述的血清稀释液为含0.8%(v/v)表面活性剂S21、0.03%(v/v)Proclin300的0.01M、pH7.4磷酸盐缓冲液;所述的标准阳性血清为PRRSV弱毒疫苗免疫清洁级实验猪的血清。4.根据权利要求1或2所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述的重组rGP5‑M蛋白包括rGP5蛋白和M蛋白;所述的rGP5蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示;所述的M蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。5.根据权利要求4所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述的rGP5蛋白和所述的M蛋白为串联融合表达。6.根据权利要求4所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述的重组rGP5‑M蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。7.根据权利要求1或2所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述镧系元素离子为Eu3+、Tb3+、Sm3+和Dy3+中的至少一种。8.根据权利要求1或2所述的PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒,其特征在于:所述的吸收垫为吸水纸;所述的反应膜的材质为硝酸纤维素膜;所述的结合垫的材质为玻璃纤维素膜;所述的样品垫的材质为玻璃纤维。2CN115932252A说明书1/8页PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明属于兽用生物制品技术领域,特别涉及一种PRRSV抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍(流产、早产、死胎和木乃伊胎),仔猪和育肥猪呼吸道疾病为特征的传染病,给养猪业带来了严重威胁和重大经济损失。根据抗原性差异,可以将PRRSV分为以Lelystadvirus(LV)为代表的欧洲型PRRSV(PRRSV1)和以VR2332毒株为代表的美洲型PRRSV(PRRSV2),目前我国流行的病毒株主要为PRRSV2。[0003]PRRSV首次于1987年在美国商品猪中发现,并且疾病迅速蔓延世界范围内频繁爆发。我国于1996年分离了该病毒