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本发明涉及一种羟基酪醇的制备方法,具体为一种从发酵液分离制备羟基酪醇的方法,结合膜分离、大孔树脂层析、减压蒸馏、薄膜蒸发、真空干燥等技术实现从发酵液中分离纯化羟基酪醇,且对环境友好,产品纯度高、收率高、安全性高,适用于工业化生产;包含以下工艺步骤:步骤1、向发酵液中加入抗氧化剂,并通过陶瓷膜微滤,去除菌体细胞,收集滤液;步骤2、滤液通过有机膜超滤去除残余的细胞、细胞碎片、培养基不溶性成分和蛋白质;步骤3、滤液通过有机膜纳滤,去除色素和无机盐;步骤4、将脱色脱盐后的滤液通过有机膜反渗透进行浓缩;步骤5、将浓缩液通过大孔吸附树脂纯化,先使用去离子水清洗去除杂质,再通过乙醇溶液洗脱目标产物。