一种高纯度羟基酪醇的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114150025A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111475984.5C12N9/42(2006.01)(22)申请日2021.12.06C07C37/74(2006.01)C07C39/11(2006.01)(71)申请人西安海斯夫生物科技有限公司地址710100陕西省西安市长安区航天基地航拓路汇航广场A座804(72)发明人孟永宏胡永员党银博郭建琦牛永洁杨璐(74)专利代理机构北京君智知识产权代理事务所(普通合伙)11305代理人吕世静(51)Int.Cl.C12P7/22(2006.01)C12N11/14(2006.01)C12N9/20(2006.01)C12N9/24(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图2页(54)发明名称一种高纯度羟基酪醇的制备方法(57)摘要本发明涉及一种高纯度羟基酪醇的制备方法，该制备方法包括制备橄榄苦苷溶液、多孔陶瓷球负载酶、多孔陶瓷球后处理与纯化等步骤。本发明制备方法的橄榄苦苷转化率达80％以上，羟基酪醇收率达80％以上，制备羟基酪醇的纯度为以重量计93％以上，本发明高纯度羟基酪醇制备方法是一种绿色环保无污染、高效连续实施方法，具有非常良好的应用前景。CN114150025ACN114150025A权利要求书1/2页1.一种高纯度羟基酪醇的制备方法，其特征在于该制备方法的步骤如下：A、制备溶液按照以克计橄榄苦苷与以毫升计乙醇水溶液的比20～100：1000，加热搅拌将橄榄苦苷溶于乙醇水溶液中，得到橄榄苦苷乙醇溶液；B、多孔陶瓷球负载酶按照以克计酶粉与以毫升计缓冲液的比1～5：20～50，分别将纤维素酶、半纤维素酶、褶皱假丝酵母脂肪酶与β‑葡萄糖苷酶溶于柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液中，接着按照以毫升计酶液与以毫升计戊二醛水溶液的比20～50：1～5，添加浓度为以体积计0.8～1.2％戊二醛水溶液，加入清洗干净的多孔陶瓷球，在摇床中在温度10～30℃与转速100～150rpm的条件下处理2～4h，分离得到的多孔陶瓷球在‑20～‑50℃的条件下预冷冻2～4h，接着在冷冻干燥机中冷冻干燥至水含量为以重量计0.5％以下，得到一种负载酶的多孔陶瓷球；C、负载酶多孔陶瓷球后处理按照以克计丙烯酸树脂与以毫升计丙酮之比为1～2：50～100，将热固性丙烯酸树脂溶解在丙酮中，然后加入步骤B得到的负载酶多孔陶瓷球，搅拌25～35min，过滤分离，其多孔陶瓷球置于通风橱中自然风干，然后使用柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液清洗，洗涤直至清洗液中没有酶，得到一种固定化酶；D、纯化将步骤C得到的固定化酶装载在生物反应器中，让步骤A得到的橄榄苦苷乙醇溶液在该生物反应器中在转速60～100rpm、温度40～55℃与流速5～20升/小时的条件下进行纯化，并且按照回流量与送到分子蒸馏处理量之比4～20：1，把从生物反应器出料口(7)排出的反应液返回到回流口(10)，余下的反应液送到两级分子蒸馏器中进行分子蒸馏，得到纯度为以重量计93％以上的羟基酪醇。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于在步骤A中，所述乙醇水溶液的浓度是以体积计20～50％。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于在步骤A中，所述橄榄苦苷乙醇溶液的浓度是20～100g/L。4.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤B中，将纤维素酶、半纤维素酶、褶皱假丝酵母脂肪酶与β‑葡萄糖苷酶溶解的缓冲液是浓度10毫摩尔、pH4.8～6.0的柠檬酸‑磷酸氢钠缓冲液。5.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤B中，多孔陶瓷球是孔径50～200μm、孔分布数量10～50、球直径3～10mm的多孔陶瓷球。6.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤B中，纤维素酶、半纤维素酶、褶皱假丝酵母脂肪酶与β‑葡萄糖苷酶的酶活都是1000～10000IU/mg。7.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤B中，纤维素酶、半纤维素酶、褶皱假丝酵母脂肪酶与β‑葡萄糖苷酶的量是1：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2。8.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤C中，热固性丙烯酸树脂是以丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸正丁酯、甲基丙烯酸甲酯与甲基丙烯酸正丁酯为单体的聚合物，它们的分子量是10000～20000。9.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于在步骤D中，所述生物反应器是由不2CN114150025A权利要求书2/2页锈钢圆柱形筒体(1)与位于该圆柱形筒两端的半球形盖(15、16)构成的，在不锈钢圆柱形筒体(1)与不锈钢金属夹层(2)之间容纳蒸汽或冷却水控温介质；在不锈钢金属夹层(2)与不锈钢金属栅网(3)之间装填负载酶