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本发明公开了一种非洲猪瘟病毒K205R蛋白特异性B细胞抗原表位多肽及其应用,属于分子免疫学技术领域。为了提供一种具有免疫保护功能或具有血清学诊断价值的非洲猪瘟病毒蛋白多肽抗原。本发明公开的抗原表位多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。本发明ASFVK205R蛋白特异性B细胞抗原表位合成多肽、合成表位多肽偶联抗原以及抗原表位融合表达蛋白作为抗原可用于特异性地检测机体免疫或感染后产生的抗ASFVK205R蛋白抗体。可用于ASFV感染诊断,疫苗免疫效果评价以及作为疫苗组份诱导免疫猪产生特异性抗体。