非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115368443A(43)申请公布日2022.11.22(21)申请号202211129845.1G01N33/577(2006.01)(22)申请日2022.09.15A61K39/42(2006.01)A61P31/20(2006.01)(71)申请人河南农业大学地址450000河南省郑州市郑东新区龙子湖高校园区15号(72)发明人庄国庆孙爱军路闻龙张昂克张改平(74)专利代理机构西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)61223专利代理师庄华红(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C07K16/08(2006.01)C12N15/13(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图9页(54)发明名称非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及应用(57)摘要本发明公开了一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，属于生物技术领域。该非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明提供了一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及利用该B细胞线性表位刺激得到的单克隆抗体及其应用，为研究CD2v蛋白胞内区功能以及建立血清学诊断方法提供了新的思考。CN115368443ACN115368443A权利要求书1/1页1.一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种权利要求1所述的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位在制备检测或预防非洲猪瘟病毒的试剂中的用途。3.一种抗非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体能够与权利要求1所述的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位特异性结合。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示。5.一种编码权利要求4所述的单克隆抗体的核酸分子。6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，编码重链可变区的核酸序列如SEQIDNO.2所示，编码轻链可变区的核酸序列如SEQIDNO.3所示。7.一种包括权利要求5或6所述核酸分子的表达载体。8.一种包括权利要求7所述表达载体的宿主细胞。9.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求3所述的单克隆抗体。10.一种包括权利要求3所述单克隆抗体的检测试剂或试剂盒。2CN115368443A说明书1/7页非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及应用技术领域[0001]本发明涉及分子免疫技术领域，涉及一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，及利用该B细胞线性表位刺激得到的单克隆抗体，还涉及该B细胞线性表位的应用及由该B细胞线性表位刺激产生的单克隆抗体的应用。背景技术[0002]非洲猪瘟病毒(AfricanSwineFeverVirus，ASFV)感染猪，引起以出血和发热为主要特征的非洲猪瘟(AfricanSwineFever，ASF)疾病。世界动物卫生组织(OIE)列其为法定报告疫病。ASFV主要感染家猪、野猪，也能感染软蜱。高致病性毒株感染可导致猪只4至15天死亡，病死率可达100％；中等毒力毒株引起的亚急性症状，死亡率较低(30‑70％)，大部分出现出血性症状；而低毒力毒株病死率较低，导致无血管损伤的慢性疾病。[0003]ASFV属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属。其双股DNA基因组长度在170至194kb之间，是由多基因家族(MGF)不同成员的获得或缺失部分基因所致，包含150多个开放阅读框，编码大约200种蛋白质，包括68个结构蛋白和超过100个非结构蛋白。在形态上，ASFV病毒粒子是一个对称的二十面体粒子，直径约为260nm，具有复杂的多包膜结构，从内到外分别是类核、核壳、内部脂质包膜、二十面体衣壳和外包膜。EP402R基因编码一种与T细胞粘附分子CD2相似的蛋白质，称为CD2v。CD2v包含一个信号肽、胞外的2个免疫球蛋白样结构域、跨膜区及C端147个氨基酸的胞内结构域组装而成的糖蛋白，其中胞内结构域包含1个酸性结构域和1个富含脯氨酸的重复序列。CD2v的胞内结构域与细胞CD2胞质结构域的氨基酸序列没有明显的同一性，此外，共聚焦显微镜结果表明表达的CD2v蛋白结构大部分位于细胞内而不是细胞表面。有研究发现，CD2v通过脯氨酸重复区域与SH3P7相互作用，可能会调节蛋白质运输参与免疫调节。现有技术研究发现，AP‑1与CD2v羧基末端(230‑304aa)结合形成CD2v‑AP‑1复合物，对ASFV毒力和免疫逃逸产生影响。因此，ASFVCD2v蛋白是疫苗和相关诊断试剂研发相关的重要靶点。但现有技术中研究较多的均为胞外区和全长