非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位肽及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960176A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202211291981.0A61P31/20(2006.01)(22)申请日2022.10.20C07K16/08(2006.01)G01N33/569(2006.01)(71)申请人重庆吉棠生物技术研究院有限公司G01N33/68(2006.01)地址402460重庆市荣昌区昌州街道灵方大道19号创新发展中心8楼13号(72)发明人欧阳红生逄大欣马乐戎吕冬梅唐小春(74)专利代理机构吉林省中玖专利代理有限公司22219专利代理师姜姗姗(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C12N15/34(2006.01)C07K19/00(2006.01)A61K39/12(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位肽及其应用(57)摘要本发明涉及非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位及其应用，以非洲猪瘟病毒B475L蛋白的氨基酸序列为材料，通过T7噬菌体展示技术将包含截短的B475L蛋白序列展示其上，构成噬菌体展示文库，利用非洲猪瘟病毒感染猪阳性血清与上述T7噬菌体展示文库的免疫沉淀后测序，鉴定其为抗原优势表位，随后通过噬菌体文库与通过非洲猪瘟病毒感染猪阳性血清的生物淘选与单个噬菌斑挑取，获得展示如SEQIDNO：1所示多肽序列的T7噬菌体，首次确定非洲猪瘟病毒B475L蛋白的B细胞抗原表位，该抗原表位的获得为以抗原表位为材料研发非洲猪瘟检测试剂及其试剂盒、单抗制备和安全、可鉴别诊断表位疫苗等急需战略防控产品奠定了基础。CN115960176ACN115960176A权利要求书1/1页1.一种非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位肽，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种能够编码所述的抗原表位肽的基因序列，其特征在于：所述的基因序列为能够编码如权利要求1所述的抗原表位肽，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种表达载体，其特征在于：所述的表达载体含有如权利要求2所述的基因序列。4.一种融合蛋白，其特征在于：所述的融合蛋白展示在噬菌体表面，其是将如权利要求2所述的基因序列与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后再表达得到。5.一种宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞含有如权利要求3所述的表达载体。6.一种抗体，其特征在于：其是将展示如权利要求4所述的融合蛋白的噬菌体作免疫原，免疫动物制备得到的抗体。7.一种分离的抗原抗体复合物，其特征在于，形成所述的复合物的抗原中包含如权利要求1所述的抗原表位肽或如权利要求4所述的融合蛋白，所述的抗原表位肽形成抗原表位，所述的抗体特异性地结合于所述的抗原表位。8.一种疫苗，其特征在于：所述的疫苗含有如权利要求1所述的抗原表位肽、如权利要求4所述的融合蛋白、如权利要求2所述的基因分子、如权利要求3所述的表达载体或者如权利要求5所述的宿主细胞。9.如权利要求8所述的一种疫苗，其特征在于：所述的疫苗还包括免疫学上可接受的载体和/或辅料。10.一种非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有如权利要求1所述的抗原表位肽。2CN115960176A说明书1/4页非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位肽及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒B475L蛋白抗原表位肽及其应用。背景技术[0002]非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是一种高致病性传染病，由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起，其临床症状主要以发热、呼吸和神经系统功能紊乱、内脏器官病变广泛性出血为主。目前ASF无有效的商品化疫苗可以预防和治疗，一经发现只能大规模扑杀。ASFV是一个复杂的二十面体DAN病毒，是非洲猪瘟病毒科，非洲猪瘟病毒属的唯一成员。该病毒由四层同心轴结构和一个六角形外膜组成，六角形外膜由病毒穿过细胞膜出芽时形成。病毒基因组的长度从170kb到193kb不等，包含150–167开放阅读框架。基因组由一个125kb左右的保守中心区域和两个编码五个多基因家族(MGFs)的可变末端组成。MGFs中长达20kb的区域，是基因删除和插入的区域，这些区域可能有助于产生抗原变异，从而帮助ASFV逃避宿主免疫系统。筛选ASFV基因组编码的具有良好免疫原性的蛋白，对于ASFV的致病性研究和检测试剂盒的开发具有重要意义，并且以抗原表位为材料研发非洲猪瘟检测试剂及其试剂盒、单抗制备和鉴别诊断表位疫苗等急需战略防控产品将产生巨大的经济效益，而且具有重要的社会效益。[0003]非洲猪瘟病毒B475L蛋白是一个