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本发明公开了外泌体分离与检测一体化微流控芯片及其方法,涉及生物医药领域。该芯片按连接顺序,依次包括进样口、分离区、检测区和质控区;所述分离区的通道包被捕获外泌体的抗体,所述检测区包被GPC?1抗体,所述质控区包被CD63抗体。本发明构建了外泌体分离与检测一体化微流控芯片,在分离区的微通道包被Tim?4,可用于肿瘤特异性外泌体表面标志物的捕获,可实现肿瘤特异性外泌体的分离;检测区包被GPC?1抗体,质控区包被CD63抗体,CD63抗体为检测外泌体的普遍标志物,作为质控;GPC?1为胰腺癌特异性标志物,用于胰腺癌的诊断。