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本发明公开了一种双层介孔有机硅空心球固相微萃取探针及其制备方法和应用。该固相微萃取探针,包括石英丝、涂覆于石英丝一端的表面涂层、以及套在石英丝另一端的中空石英管,所述的表面涂层由双层介孔有机硅空心球和耐高温F67树脂组成。本发明提出的双层介孔有机硅空心球固相微萃取探针表面含有由双层介孔有机硅空心球和耐高温F67树脂制备的涂层,双层介孔有机硅空心球具有有序的介孔结构、热稳定性好、比表面积大,可有效提高涂层对尺寸在1?4nm范围内的短链和中链氯化石蜡的萃取和富集。