植物中可溶性糖含量的测定.doc

(完整版)植物中可溶性糖含量的测定(完整版)植物中可溶性糖含量的测定(完整版)植物中可溶性糖含量的测定植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH3的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应）,所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深,葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差.糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一)实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂1.80%乙醇。2.葡萄糖标准溶液（100μg/mL）：准确称取100mg分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至100mL，使用时再稀释10倍（100μg/mL)。3．蒽酮试剂:称取1.0g蒽酮,溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2～3周.（三）仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机,恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（5、1、0.5mL)，剪刀,瓷盘，玻棒，水浴锅,电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤1.样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5~1。0g(或干样粉末5～100mg),放入大试管中，加入15mL蒸馏水,在沸水浴中煮沸20min，取出冷却，过滤入100mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。2。标准曲线制作取6支大试管，从0～5分别编号，按表24-1加入各试剂.表24-1蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂管号012345100μg/mL葡萄糖溶液(mL）00。20。40.60。81.0蒸馏水(mL）1。00。80.60.40.20蒽酮试剂(mL）5。05。05.05。05。05。0葡萄糖量（μg）020406080100将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下,用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量(μg）为横坐标绘制标准曲线。3．样品测定取待测样品提取液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。重复3次。四、结果计算溶性糖含量(％）＝从标准曲线查得糖的量(μg)×提取液体积（ml)×稀释倍数/［测定用样品液的体积（ml）×样品重量(g)×106］×100式中：C-—从标准曲线查得葡萄糖量，μg。VT——样品提取液总体积,mL。V1-—显色时取样品液量，mL.W—-样品重（g）.Ⅱ苯酚法测定可溶性糖一、原理植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖.苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单,灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。二、实验材料、试剂与仪器设备(一）实验材料新鲜的植物叶片。（二）试剂1。90%苯酚溶液：称取90g苯酚(AR），加蒸馏水溶解并定容至100mL，在室温下可保存数月.2.9%苯酚溶液:取3mL90%苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。3.浓硫酸(比重1.84）。4。1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g，加少量水溶解,移入100mL容量瓶中，加入0。5mL浓硫酸，用蒸馏水定