植物组织中可溶性糖含量的测定.docx

九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期代谢活动也发生相应的变化碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物.在低浓度时625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便但没有专一性对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg配制成500mL溶液即得每mL含糖为200μg的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片于研钵中加80%酒精4ml仔细研磨成匀浆倒入离心管内置于80℃水浴中不断搅拌30min离心10分钟(5000转/min)收集上清液于10ml的刻度试管中其残渣加2ml80%酒精重复提1次合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭80℃水浴脱色30min定容至10ml过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL放入一干洁的试管中加蒽酮试剂5mL混合之于沸水浴中煮沸10分钟取出冷却然后于分光光度计上进行测定波长为625nm测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算）然后再行计算样品中含糖百分数。3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度然后绘制A625－糖浓度曲线或进行直线回归求得直线方程。试剂（ml)管号123456葡萄糖标准液00.050.10.20.30.480%酒精1.00.950.90.80.70.6蒽酮-硫酸试剂555555葡萄糖浓度（ug/ml)010204060804.计算样品中含糖量％设V为植物样品稀释后的体积（mL）C为提取液的含糖量(μg/mL)W为植物组织鲜重(g)则得计算式如下：可溶性糖含量％＝(C×V)/(W×106)×100%五．注意事项1.蒽酮试剂含有浓硫酸使用时应该小心2.离心时要平衡3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍六．实验结果及分析实验测得吸光度值为0.175而标准曲线如图1标准曲线方程为y=0.3573x-0.4879将y=0.175代入方程得x=1.185即C=1.185(μg/mL)。可溶性糖含量=(C×V)/(W×106)×100%=（1.185*6）/（0.5*106）*100%=13.42%所以实验测得新鲜青菜叶片可溶性糖含量约为13.42%。（标准曲线见下表）图1内容总结（1）九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期代谢活动也发生相应的变化碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化