无菌检测方法.doc

医疗器械产品无菌检测方法(第00版)文献编号：编制：日期审核：日期批准：日期受控状态：分发号：年月日发布年月日实行目的建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以拟定灭菌的有效性。范围本规程合用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。依据《中国药典》2023版二部设备、器皿、药品的准备4.1设备的准备电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯4.2器皿的准备锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm×15mm）、斜口钳、玻璃棒。4.3药品的准备硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁琼脂培养基、纯化水、pH7.0无菌氯化钠溶液。器皿的清洗将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。取样按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品培养基的制备7.1硫乙醇酸盐流体培养基的制备取15g硫乙醇酸盐流体培养基和500ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45℃待用。7.2改良马丁培养基的制备取21g改良马丁培养基粉末和500ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。8.培养基灵敏度检查8.1菌种的规定培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、白色念珠菌）传代次数不得超过5代。8.2菌液的制备接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23-28℃培养24小时。将上述经24小时培养后的培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。制备好的菌液应在2-8℃条件下保存，并在24小时内使用。8.3接种及培养取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养3天逐日观测并记录。取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养5天，逐日观测记录。8.4灵敏度检测结果判断空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基试管菌落均生长良好，则鉴定该培养基的灵敏度检查符合规定。9.供试品的无菌检测9.1对照实验取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养14天逐日观测并记录。取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养14天，逐日观测记录。9.2供试品的准备及接种于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（2～3cm）,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中，此外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量改良马丁琼脂培养基中，冷却。9.2培养将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中30～35℃条件下培养14天，逐日观测是否有菌落生长并记录；将接种过的改良马丁琼脂培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中23～28℃条件下培养14天，逐日观测是否有菌落生长并记录。10.供试品无菌检测结果鉴定若上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长，则可鉴定供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。11.检测频次外包灭菌产品的无菌验证应每年做一次，并以最难灭菌产品的无菌检测为准；外包灭菌产品的无菌检测按灭菌批次随机取样检测，每月一次12.无菌检测报告（见附表1）13.文献版本修改记录（见附表2）无菌检测报告WIL/QR6.4—13NO：检测依据《中国药典》2023版二部检测日期样品数量4样品批号样品名称样品规格培养基的灵敏度检测硫乙醇酸盐流体培养基（培养3天）改良马丁培养基（培养5天）培养天数接种金黄色葡萄球菌接种金黄色葡萄球菌空白接种白色念珠菌接种白色念珠菌空白12345结论：日期：供试品的无菌检测培养天数硫乙醇酸盐流体培养基（培养14天）改良马丁培养基（培养14天）金黄色葡萄球菌样品1样品2空白白色念珠菌样品3样品4空白1234567891011121314结论：报告日期：备注“+”表达有菌生长；“-”表达无菌生长；培养基的灵敏度检测中空白实验应无菌生长，接种过菌液的应生长良好，否则培养基不合格；在培养基灵敏度检测合格的前提下，若供试品的无菌检测中接种过菌液的应生长良好，空白实验