无菌检测方法样本.doc

四川乐至贵均卫生材料有限公司医疗器械产品无菌检测办法目建立无菌检测原则规程，对灭菌后医疗器械产品进行无菌检测，以拟定灭菌有效性。范畴本规程合用于我司对医疗器械产品无菌检测。根据《中华人民共和国药典》设备、器皿、药物准备4.1设备准备电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、干净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯4.2器皿准备锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm×15mm）、斜口钳、玻璃棒。4.3药物准备硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、纯化水、pH7.0无菌氯化钠溶液。器皿清洗将所需锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。取样按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号产品4件作无菌检测样品培养基制备7.1硫乙醇酸盐流体培养基制备取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45℃待用。7.2胰酪大豆胨液体培养基制备取15g胰酪大豆胨和1000ml纯化水于烧杯中混合，操作办法同6.1。8.培养基敏捷度检查8.1菌种规定培养基敏捷度检查所用菌株（金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）传代次数不得超过5代。8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，20-25℃培养24小时。将上述经24小时培养后培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数不大于100cfu(菌落形成单位)菌悬液。制备好菌液应在2-8℃条件下保存，并在24小时内使用。8.3接种及培养取每管装量15ml硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种不大于100cfu金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养3天逐日观测并记录。取每管装量10ml胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种不大于100cfu枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25℃培养5天，逐日观测记录。8.4敏捷度检测成果判断空白对照管应无菌生长，若加菌培养基试管菌落均生长良好，则鉴定该培养基敏捷度检查符合规定。9.供试品无菌检测9.1对照实验取每管装量15ml硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种不大于100cfu金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养14天逐日观测并记录。取每管装量10ml胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种不大于100cfu枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25℃培养14天，逐日观测记录。9.2供试品准备及接种于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（2～3cm）,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品适量硫乙醇酸盐流体培养基中，此外2件接种于各培养皿足以浸没供试品适量胰酪大豆胨液体培养基中，冷却。9.2培养将接种过硫乙醇酸盐流体培养基培养皿倒置于电热培养箱中30～35℃条件下培养14天，逐日观测与否有菌落生长并记录；将接种过胰酪大豆胨液体培养基培养皿倒置于霉菌培养箱中20～25℃条件下培养14天，逐日观测与否有菌落生长并记录。10.供试品无菌检测成果鉴定若上述接种后培养基经14天培养后均无菌落生长，则可鉴定供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。11.无菌检测报告（见附表1）无菌检测报告检测根据《中华人民共和国药典》检测日期样品数量样品批号样品名称样品规格培养基敏捷度检测硫乙醇酸盐流体培养基（培养3天）胰酪大豆胨培养基（培养5天）培养天数接种金黄色葡萄球菌接种金黄色葡萄球菌空白接种枯草芽孢杆菌接种枯草芽孢杆菌空白12345结论：日期：供试品无菌检测培养天数硫乙醇酸盐流体培养基（培养14天）改良马丁培养基（培养14天）金黄色葡萄球菌样品1样品2空白白色念珠菌样品3样品4空白1234567891011121314结论：报告日期：备注“+”表达有菌生长；“-”表达无菌生长；培养基敏捷度检测中空白实验应无菌生长，接种过菌液应生长良好，否则培养基不合格；在培养基敏捷度检测合格前提下，若供试品无菌检测中接种过菌液应生长良好，空白实验和样品检测应无菌生长；否则供试品无菌检测不合格。检测者复核者