流式细胞术0.pptx

第一部分流式细胞术的一般介绍概念流式细胞仪特点FACSCaliburBDLSRFACSVantageDiVaFACSAria流式细胞仪检测范围临床研究基础研究流式细胞仪的工作原理激光光源LongpassShortpassBandpass液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱细胞分选系统FluorescenceActivatedCellSorting信号检测--散色光信号检测--荧光信号数据显示类型二维等高图和密度图光谱交叉荧光补偿方法抗体使用原则样品培养细胞新鲜组织石蜡包埋流式细胞仪测定常用的荧光染料有多种,他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也各异,选择荧光染料时必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长(如氩离子气体激光管,它的发射光波488ηm,氦氖离子气体激光管发射光波长633ηm）。488ηm激光光源常用的荧光染料及他们的激发光和发射光波长分别是：激发光波长发射光峰值（ηm）（ηm）FITC（异硫氰酸荧光素）488525（绿）PE（藻红蛋白）488575（橙红）PI（碘化丙啶）488630（橙红）ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)488610（红）CY5（化青素）488675（深红）PreCP(叶绿素蛋白)488675（深红）第二部分流式细胞术在不同领域的应用细胞周期分析在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化。正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go),G1期细胞虽有DNA合成，但DNA含量仍为2N，为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞含有最大量的DNA(4N)。细胞经固定后用PI(碘化丙啶)等荧光染料染色即可上机测定。但标本需先经RNA酶处理以排除RNA干扰。样品制备建立获取模式，获取数据（PI单染分析细胞周期，同时看凋亡）数据分析细胞凋亡分析细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。2.光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上，前散射光（FSC）与细胞的大小有关，侧散射光（SSC）反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法人外周血淋巴细胞亚群检测T淋巴细胞CD4+T（Th)淋巴细胞检测CD8+Ts淋巴细胞检测B淋巴细胞检测NK细胞检测结束语