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基因工程重组体转入受体细胞第五章重组体导入受体细胞第一节重组体导入细菌细胞1.目的使用丧失了限制体系的大肠杆菌。如K12系列的大肠杆菌。用CaCl2处理大肠杆菌，能增加膜的通透性。使用丧失了限制体系的大肠杆菌。⑤使用感受态菌时必须迅速融化二、重组DNA导入大肠杆菌只合成尾部蛋白和包装识别蛋白原指将噬菌体、病毒或以其为载体构建的重组子导入受体细胞的过程。（每gDNA能形成106噬菌斑）。(4)体外包装过程⑤使用感受态菌时必须迅速融化合成头部蛋白和尾部蛋白，但不能聚合和包装DNA体外包装好的重组噬菌体感染受体菌，使受体菌发生溶菌，形成噬菌斑。1mol/LLiCl处理冰浴15分钟，2°C离心集菌体外包装的噬菌体的转导用冰冷的60mMCaCl2重悬在cI857基因突变的噬菌体的基础上，选择两种外壳蛋白的突变型噬菌体。（2）转导（transduction)要充分，使细菌细胞膜增加通透性。二、重组DNA导入大肠杆菌转化：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。转导：当病毒从被感染的供体细胞释放出来，再次感染另一受体细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用转染(transfection)例：溶菌时，裂解的DNA片段被另一细菌摄取。λ噬菌体的生活史每gDNA转化成功的细菌克隆数。10ng载体DNALB培养受体菌至OD600=0.5-0.64.平板培养基培养细菌把重组的噬菌体DNA或Cosmid质粒DNA包装成具有感染能力的噬菌体颗粒。把重组的噬菌体DNA或Cosmid质粒DNA包装成具有感染能力的噬菌体颗粒。又称高速微型子弹射击法（High-velocitymicroprojectiles)体外包装的噬菌体的转导体外包装的噬菌体的转导cI857基因是个温度敏感性阻遏蛋白基因，感染细菌后，在32℃下培养细菌时能够保持溶源性。体外包装的噬菌体的转导转染(transfection)转化：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。融化后一般不能再次冻存使用。二、重组DNA导入大肠杆菌Onice混合，静置10分钟目的基因①生长状态把重组的噬菌体DNA或Cosmid质粒DNA包装成具有感染能力的噬菌体颗粒。cI857基因是个温度敏感性阻遏蛋白基因，感染细菌后，在32℃下培养细菌时能够保持溶源性。但当温度升高到44℃—45℃时，就会导致cI基因编码的阻遏蛋白失活，DNA复制、外壳蛋白合成。E基因突变(4)体外包装过程体外包装好的重组噬菌体感染受体菌，使受体菌发生溶菌，形成噬菌斑。（每gDNA能形成106噬菌斑）。第二节外源基因导入真核细胞转化率高的菌株；有突变的菌株（与导入的载体基因互补）；不育的菌株（不会与其他酵母接合）。（1）利用原生质球进行转化酵母植物细胞又称高速微型子弹射击法（High-velocitymicroprojectiles)基因枪（1）原理：不需要载体。脂质体有商业试剂盒（如LifeTechnologies）。直接把外源DNA注射到宿主细胞核里，使其整合到染色体上。感谢观看