一种双靶siRNA分子及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103266111A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103266111103266111A(43)申请公布日2013.08.28(21)申请号201310208385.6A61P35/00(2006.01)(22)申请日2013.05.29(71)申请人南通大学地址226000江苏省南通市啬园路9号申请人南通市肿瘤医院百奥迈科生物技术有限公司(72)发明人陈莉张一心王桂兰王建力何松秦婧李杏玉吴圆圆李铁军(74)专利代理机构上海申汇专利代理有限公司31001代理人翁若莹王婧(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页序列表6页序列表6页附图3页附图3页(54)发明名称一种双靶siRNA分子及其用途(57)摘要本发明涉及一种双靶siRNA分子及其应用，所述的靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子，其特征在于，其序列由如下正义链、反义链1和反义链2组成，其中正义链为5’-CCACAAUGGCUGAGCACUUAGGAUGACUGAGUACCUGAANn-3’(SEQIDNO：1)，反义链1为5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGGNn-3’(SEQIDNO：2)，反义链2为5’-UUCAGGUACUCAGUCAUCCNn-3’(SEQIDNO：3)。该siRNA分子可以应用于制备调节细胞中NET-1基因和Bcl2基因功能的药物中发挥RNA干扰的作用，诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移和侵袭，达到治疗肿瘤的目的。CN103266111ACN10326ACN103266111A权利要求书1/1页1.一种靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子，其特征在于，其序列由如下正义链、反义链1和反义链2组成：正义链：5’-CCACAAUGGCUGAGCACUUAGGAUGACUGAGUACCUGAANn-3’(SEQIDNO：1)反义链1：5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGGNn-3’(SEQIDNO：2)，反义链2：5’-UUCAGGUACUCAGUCAUCCNn-3’(SEQIDNO：3)。其中，N是胞嘧啶C、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT，n代表N的个数，n是0～2的整数。2.如权利要求1所述的靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子，其特征在于，所述的N为dT，且n为2。3.如权利要求1所述的靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子，其特征在于，所述的n为0。4.权利要求1所述的靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子在制备抑制细胞中NET-1基因和Bcl2基因功能的药物中的应用。5.权利要求1所述的靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的双靶siRNA双链分子在制备治疗抗肝癌药物中的应用。2CN103266111A说明书1/6页一种双靶siRNA分子及其用途技术领域[0001]本发明涉及一种双靶siRNA分子及其用途，尤其是指靶向肿瘤基因NET-1和Bcl2的siRNA分子及其应用。背景技术[0002]RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA(double-strandRNA，dsRNA)引发其同源信使RNA(messengerRNA，mRNA)酶解的一种转录后基因沉默形式(Nature.1998，391：806-811)。长双链RNA进入细胞后，被Dicer酶结合并切割。Dicer酶的切割产物长度通常为20～25bp，且在每条链的3’末端有2个核苷酸悬垂的小干扰RNA(smallinterferenceRNA，siRNA)。siRNA的一条链掺入到RNA-诱导的沉默复合物中(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)，与互补RNA的序列配对。RISC首先介导siRNA双链解旋，与RISC耦合的单链的siRNA以序列特异的方式与靶mRNA结合，之后由RISC的催化组分切割靶mRNA。切割靶mRNA可以抑制其翻译，最终抑制该基因的表达。现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力，是理想的阻断基因表达的治疗手段。[0003]RNAi在医药领域有广阔的应用前景，如抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等。双链干扰核酸可设计成能被Dicer酶剪切的称做Dicer底物的长双链形式，或者是短的、不需Dicer酶剪切直接作为RISC底物的形式。合成的双链RNA与目的基因序列互补，导入细胞或生物体后，被内源的遗传物质识别，激活RNAi途径。利用这种机制，RNAi使靶基因的表达水