一种siRNA分子及其抗肿瘤应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103243100A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103243100103243100A(43)申请公布日2013.08.14(21)申请号201310206799.5A61K48/00(2006.01)(22)申请日2013.05.29A61P35/00(2006.01)(71)申请人南通大学地址226000江苏省南通市啬园路9号申请人南通市第一人民医院百奥迈科生物技术有限公司(72)发明人陈莉仲崇俊王建力张一心吴圆圆王桂兰周家名乔宇李铁军(74)专利代理机构上海申汇专利代理有限公司31001代理人翁若莹王婧(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页序列表6页序列表6页附图4页附图4页(54)发明名称一种siRNA分子及其抗肿瘤应用(57)摘要本发明提供了一种靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子，其特征在于，其序列由如下正义链和反义链1、2组成，其中正义链为5’-GCUUCCUACAGCACAACAAACCACAAUGGCUGAGCACUUNn-3’，反义链1为5’-UUGUUGUGCUGUAGGAAGCNn-3’，反义链2为5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGGNn-3’；上述siRNA分子中，N是4种DNA碱基及其脱氧形式中的任何一种，即胞嘧啶C、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0～2的整数。本发明的siRNA分子可以应用于制备调节细胞中NET-1基因和VEGF基因功能的药物中发挥RNA干扰的作用，诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移和侵袭，达到抗肿瘤的目的。CN103243100ACN10324ACN103243100A权利要求书1/1页1.一种靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子，其特征在于，其序列由如下正义链和反义链1、2组成：正义链：5’-GCUUCCUACAGCACAACAAACCACAAUGGCUGAGCACUUNn-3’，反义链1：5’-UUGUUGUGCUGUAGGAAGCNn-3’，反义链2：5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGGNn-3’；上述siRNA分子中，N是4种DNA碱基及其脱氧形式中的任何一种，即胞嘧啶C、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0～2的整数。2.如权利要求1所述的靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子，其特征在于，所述的N为dT，且n为2。3.如权利要求1所述的靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子，其特征在于，所述的n为0。4.权利要求1-3中任一项所述的靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子在在制备调节细胞中NET-1基因和VEGF基因功能的药物中的应用。5.权利要求1-3中任一项所述的靶向VEGF和NET-1基因的双靶向siRNA双链分子在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。2CN103243100A说明书1/6页一种siRNA分子及其抗肿瘤应用技术领域[0001]本发明涉及一种siRNA分子，尤其是指靶向NET-1和VEGF基因的siRNA分子及其抗肿瘤应用。背景技术[0002]RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA(double-strandRNA，dsRNA)引发其同源信使RNA(messengerRNA，mRNA)酶解的一种转录后基因沉默形式(Nature.1998，391：806-811)。长双链RNA进入细胞后，被Dicer酶结合并切割。Dicer酶的切割产物长度通常为20～25bp，且在每条链的3’末端有2个核苷酸悬垂的小干扰RNA(smallinterferenceRNA，siRNA)。siRNA的一条链掺入到RNA-诱导的沉默复合物中(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)，与互补RNA的序列配对。RISC首先介导siRNA双链解旋，与RISC耦合的单链的siRNA以序列特异的方式与靶mRNA结合，之后由RISC的催化组分切割靶mRNA。切割靶mRNA可以抑制其翻译，最终抑制该基因的表达。现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力，是理想的阻断基因表达的治疗手段。[0003]RNAi在医药领域有广阔的应用前景，如抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等。双链干扰核酸可设计成能被Dicer酶剪切的称做Dicer底物的长双链形式，或者是短的、不需Dicer酶剪切直接作为RISC底物的形式。合成的双链RNA与目的