一种用于人类线粒体基因检测的捕获探针组及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105779590A(43)申请公布日2016.07.20(21)申请号201610151170.9(22)申请日2016.03.16(71)申请人北京迈基诺基因科技有限责任公司地址102200北京市昌平区回龙观镇生命园路29号1号B205室(72)发明人伍建林朋(74)专利代理机构北京国坤专利代理事务所(普通合伙)11491代理人姜彦(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表54页附图2页(54)发明名称一种用于人类线粒体基因检测的捕获探针组及试剂盒(57)摘要本发明提供一种用于人类线粒体基因检测的探针组及试剂盒，所述探针组可覆盖人类线粒体全基因组序列，探针序列为SEQIDNo：1-213。本发明结合拥有自主知识产权的基因捕获测序技术，可以一次性检测出线粒体DNA的扩增，缺失，突变等基因变异信息，并且可同时处理多个样本，具有耗时短，成本低、特异性强的优点，可显著提高测序效果。本发明还提供一种用于人类线粒体全基因检测的试剂盒，所述试剂盒包含可检测线粒体全基因组的捕获探针及相关试剂，本发明的使用可为尽早采取正确、合理的干预提供依据，符合精准医疗的发展趋势。CN105779590ACN105779590A权利要求书1/1页1.一种用于检测人类线粒体全基因组的探针序列，其特征在于：所述探针为DNA序列，所述探针根据人类线粒体基因的全基因组区序列设计，所述具体探针序列为SEQIDNo：1-213，每条探针长度为78bp的寡核苷酸。2.根据权利要求1的探针序列，其特征在于：所述具体探针序列为SEQIDNo：1-213。3.一种检测人类线粒体基因的捕测序方获法，其特征在于：利用权利要求2所述的探针进行杂交捕获和测序分析。4.根据权利要求3所述的方法，具体步骤为：1)制备DNA全基因组文库：将从待测样品和对照正常样品中提取的DNA，将其打断，扩增，从而建立含人类线粒体相关目标基因区的全基因组文库；2)捕获目标基因区域；3)基因测序：利用新一代测序仪进行高通量测序；4)基因序列的生物信息分析。5.根据权利要求4的方法，其特征在于：其中步骤2)中的所述的捕获目标基因区域具体步骤为：1)捕获探针的设计与制备；2)目标基因的杂交捕获；其中步骤3)中的测序采用第二代测序技术—如IlluminaNexseq500测序平台，LifeTech公司的IonProton测序仪等平台，从而获得样本中的核酸分子的核苷酸序列；其中步骤4)中所述的生物信息学分析具体为对DNA突变和扩增缺失进行分析。6.一种人类线粒体基因多种突变检测分析试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1中所述人类线粒体基因的全基因组捕获探针组、富集缓冲液BL、富集缓冲液HY、文库富集结合缓冲液、洗涤缓冲液WB1、洗涤缓冲液WB3、文库富集洗脱液、缓冲液NE、PCR反应液、产物纯化洗脱液，用于对线粒体全基因组捕获产物进行检测。7.如权利要求6所述的探针在制备检测人类线粒体基因多种突变的试剂盒中的应用。8.一种如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：在检测人类线粒体基因多种突变中的应用。2CN105779590A说明书1/8页一种用于人类线粒体基因检测的捕获探针组及试剂盒技术领域[0001]本发明属于基因检测及分子遗传学领域，具体的说，具体涉及一种用于人类线粒体基因的捕获、测序的探针组及试剂盒。背景技术[0002]线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的、重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷酸化的场所，参与能量代谢、细胞凋亡、维持细胞内钙铁离子平衡及其他生命活动的信号传导。人类线粒体DNA(mtDNA)全长为16596bp，为非常紧凑的环状双链DNA，外环为重链(H)，内环为轻链(L)，除有个1个与DNA复制其实有关的87bp的D环外，其他基因均无内含子。mtDNA共包含37个基因，这37个基因中有22个编码转移核糖核酸(tRNA)、2个编码核糖体核糖核酸(12S和16SrRNA)、12个编码多肽。动物模型和人类研究证据均证明，mtDNA突变是引起人类多因素疾病，部分遗传性疾病以及衰老的重要原因之一，因此线粒体DNA的研究是近20年来分子生物学研究的重要课题之一，如何准确快速的获得个体的线粒体基因全序列，对序列信息进行分析都有着极其重要的意义。[0003]理想的遗传学检测线粒体基因突变是发现导致线粒体结构和功能缺陷的相关基因突变。线粒体基因突变可以是单个基因的缺失或者扩增，也可以是连续几个基因片段的缺失或扩增，还可以是某几个碱基的突变。直接测序目前为止是突变分析的金标准，目前临床上只能选择少数常见的线粒体基因位点进行突变和缺失筛查，阳性率很低