一种用于检测甲基丙二酸血症相关致病基因的探针组及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111440856A(43)申请公布日2020.07.24(21)申请号201811618918.7(22)申请日2018.12.28(71)申请人北京迈基诺基因科技股份有限公司地址101300北京市顺义区安庆大街九号院巨鸿大厦A座二层(72)发明人伍建姬晓雯郜玉杰(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅白艳(51)Int.Cl.C12Q1/6883(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表19页附图3页(54)发明名称一种用于检测甲基丙二酸血症相关致病基因的探针组及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于检测甲基丙二酸血症相关致病基因的探针组及试剂盒。本发明提供了一种甲基丙二酸血症相关基因捕获的捕获探针。本发明提供的捕获探针，由序列表中序列1至序列99所示的探针组成。本发明的试剂盒能同时检测MUT，MMAA，MMAB，MMADHC和MMACHC等甲基丙二酸血症的致病基因；2、对于多种点突变类型的甲基丙二酸血症均可检测；检测MUT，MMAA，MMAB，MMADHC和MMACHC等多个基因的序列，有利于新的致病突变的发现，为甲基丙二酸血症的遗传学基础提供新的发现手段。CN111440856ACN111440856A权利要求书1/2页1.一种甲基丙二酸血症相关基因捕获的捕获探针，由序列表中序列1至序列99所示的探针组成。2.根据权利要求1所述的捕获探针，其特征在于：所述每条探针均标记生物素。3.一种甲基丙二酸血症相关基因捕获的试剂盒，包括权利要求1或2所述的捕获探针所示的组分1)。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括如下独立包装的各个组分：2)富集缓冲液，其包括人cot-1DNA、鲑鱼精DNA、引物1和引物2；所述引物1的核苷酸序列为序列100；所述引物2的核苷酸序列为序列101；3)杂交缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl、柠檬酸钠、BSA和Tween20；4)结合缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl和EDTA；5)漂洗液1，包括SDS和柠檬酸三钠缓冲液；6)漂洗液2，包括SDS和10倍稀释的柠檬酸三钠缓冲液；7)NaOH水溶液；8)Tris-HCl缓冲液；9)PCR反应液；所述PCR反应液包括引物3和引物4；所述引物3的核苷酸序列为序列102；所述引物4的核苷酸序列为序列103；所述引物3和所述引物4的最后一位核苷酸为硫代修饰；10)TE缓冲液。5.权利要求1或2所述的捕获探针或权利要求3或4所述的试剂盒在制备捕获待测样本中甲基丙二酸血症相关基因的产品中的应用。6.权利要求1或2所述的捕获探针或权利要求3或4所述的试剂盒在制备测序待测样本中甲基丙二酸血症相关基因产品中的应用。7.权利要求1或2所述的捕获探针或权利要求3或4所述的试剂盒或权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述甲基丙二酸血症相关基因为MUT基因、MMAA基因、MMAB基因、MMADHC基因和/或MMACHC基因。8.权利要求1或2所述的捕获探针或权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测或预测待测者是否患有甲基丙二酸血症产品中的应用。9.一种捕获待测样本中甲基丙二酸血症相关基因的方法，包括如下步骤：利用权利要求1或2)所述的捕获探针对待测样本的基因组DNA进行捕获，得到捕获片段；实现捕获待测样本中甲基丙二酸血症相关基因。10.一种测序待测样本中甲基丙二酸血症相关基因或基因突变位点的方法，包括如下步骤：1)利用权利要求1或2)所述的捕获探针对待测样本的基因组DNA进行捕获，得到捕获片段；2CN111440856A权利要求书2/2页2)用所述权利要求3或4所述的试剂盒中的PCR反应液进行扩增，得到测序文库；3)对所述测序文库进行测序，得到待测样本中甲基丙二酸血症相关基因或基因突变位点的测序结果。3CN111440856A说明书1/9页一种用于检测甲基丙二酸血症相关致病基因的探针组及试剂盒技术领域[0001]本发明属于基因工程、分子遗传学及基因检测领域，具体涉及一种用于检测甲基丙二酸血症相关致病基因的探针组及试剂盒。背景技术[0002]甲基丙二酸血症(methylmalonicacidemia,MMA)，也称为甲基丙二酸尿症(methylmalonicaciduria)，是先天有机酸代谢异常中最常见的病种，是多种原因所致体内甲基丙二酸积蓄的总称，是一种常染色体隐性遗传病。[0003]甲基丙二酸是甲基丙二酰辅酶A的代谢产物，正常情况下在甲基丙二酰甲基钴胺辅酶A变位酶及维生素B12的作用下转化生成琥珀酸，参与三羧酸循环。甲基丙二酰辅酶A变位酶缺陷或维生素B12代谢障碍导致甲基丙二酸、丙酸、甲基