一种检测SSAT含量的体外检测试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106198965A(43)申请公布日2016.12.07(21)申请号201610782907.7(22)申请日2016.08.31(71)申请人辽宁迈迪生物科技股份有限公司地址117004辽宁省本溪市本溪经济开发区香槐路166栋(72)发明人李文欣金雪花宫晓丽王洪波王帅刘峰(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002代理人李颖周秀梅(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表1页附图2页(54)发明名称一种检测SSAT含量的体外检测试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明涉及一种用于检测亚精胺/精胺乙酰转移酶(spermidine/spermineN1-actyltransferase，简称SSAT)含量的方法，特别是一种检测SSAT含量的体外检测试剂盒及其检测方法。包括R1、R2试剂、SSAT标准品和SSAT质控品；R1、R2试剂为纳米金标记物R1、R2试剂，其中，实际用量为R1试剂比R2试剂比为1:3至3:1。本发明体外检测试剂盒利用纳米金与抗体结合的生物特性，与传统生化检测方法相结合，将其用于SSAT含量的体外检测，开辟了SSAT含量的体外诊断学新方法。CN106198965ACN106198965A权利要求书1/1页1.一种检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：包括R1、R2试剂、SSAT标准品和SSAT质控品；R1、R2试剂为纳米金标记物R1、R2试剂，其中，R1试剂与R2试剂为1:3至3:1。2.按权利要求1所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述纳米金标记物R1、R2试剂是针对重组人SSAT抗原所制备的鼠抗人单克隆抗体经纳米金标记所得。3.按权利要求2所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂为单偶联5F4的纳米金的保存液，R2试剂为单偶联2D6的纳米金的保存液；其中，R1试剂中5F4的添加量为5-40μg/mL，R2试剂中2D6的添加量为5-40μg/mL。4.按权利要求3所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述R1、R2试剂中保存液按重量百分比计，均为Tris0-0.6％、BSA0.2-3％、PEG-200000.1-0.5％、海藻糖0.5-8％、PVP-400-1.5％、Tween-800-0.5％、叠氮钠0.02-0.1％，PEG60001-5％，NaCl0.6-1.6％，余量组分为水。5.按权利要求1所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述SSAT标准品为重组人SSAT抗原经纯化所得的精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的重组酶；SSAT质控品为重组人SSAT抗原经纯化所得的精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的重组酶或含有该酶的样本。6.按权利要求5所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述重组人SSAT抗原经纯化所得的精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的重组酶为将产精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的重组大肠杆菌BL21(DE3)接种于种子培养基中，于30～37℃振荡培养8～12h，而后将种子培养液按体积比3～10％的接种量接种至表达培养基，于30～37℃振荡培养4～6h小时；而后向表达培养基中添加诱导剂，于20～30℃振荡诱导培养14～22h，所得培养液离心后收集上清液，即为胞外粗提重组酶SSAT；沉淀离心收集菌体细胞沉淀并超声破碎，将所得超声破碎液离心，取上清，即为胞内粗提重组酶SSAT；将获得胞外和胞内粗提重组酶经纯化，即可。7.按权利要求6所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述产精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的重组大肠杆菌BL21(DE3)为将经密码子优化的精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)基因(SEQIDNo.1)两端进行修饰，而后与pET-39b(+)载体连接，连接后转化到大肠杆菌感受态细胞，得到重组大肠杆菌，待用。8.按权利要求6所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述表达培养基成分按克/升计为：蛋白胨9～11g，酵母粉5～24g，MgCl20～0.83g，KCl0～0.186g，ZnCl20～0.186g，50％的甘油0～20％，50％的蔗糖0～20％，50％的葡萄糖0～20％，精氨酸0～10mM，半胱氨酸0～10mM，其余成分为0.25mol/LTris-HCl。9.按权利要求6所述的检测SSAT含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述表达培养基中添加的诱导剂为每升所述表达培养基0～5g，其中诱导剂为IPTG或乳糖。10.一种权利要求1所述的利用检测S