抗CD19蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108659128A(43)申请公布日2018.10.16(21)申请号201810540600.5G01N33/68(2006.01)(22)申请日2018.05.30G01N33/577(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人王丹杨清海陈惠玲蒋宁城王小亚(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人林祥翔黄以琳(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N5/20(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表4页附图3页(54)发明名称抗CD19蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可以识别人白细胞分化抗原CD19的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。其中，选取CD19蛋白C末端的第527位至551位氨基酸序列为抗原肽，抗原肽与KLH载体蛋白偶联后得到所述免疫原。免疫原免疫小鼠，最终获得的抗体26D3为IgG1κ亚型，经基因克隆的方式获得其编码重链和轻链可变区的序列。该抗体可用于CD19蛋白的免疫检测，可以通过ELISA以及免疫组化的方法鉴别肿瘤的发生和增生，属于生物检测领域。CN108659128ACN108659128A权利要求书1/1页1.一种抗CD19单克隆抗体，由保藏号为CGMCCNO15488的杂交瘤细胞株产生。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别CD19蛋白。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别CD19蛋白中的SEQID1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQID3所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQID4所示的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQID5所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID6所示的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG1κ亚型单克隆抗体。7.一种抗CD19单克隆抗体的制备方法，其特征在于，免疫原的制备方法为：选取CD19蛋白C末端的第527位至551位氨基酸序列为抗原肽，所述抗原肽与KLH载体蛋白偶联后得到免疫原；所述抗原肽的氨基酸序列为SEQID2所示的氨基酸序列。8.一株分泌抗CD19蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株26D3，所述细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO15488。9.权利要求1-6任一所述的单克隆抗体，在CD19蛋白免疫检测中的用途。10.根据权利要求9所述的免疫检测，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。2CN108659128A说明书1/8页抗CD19蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CD19蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。背景技术[0002]CD19(白细胞分化抗原19，ClusterofDifferentiation19)为免疫球蛋白超家族成员之一，是一种长度为556个氨基酸，分子量为95kDa的糖蛋白。它有两个免疫球蛋白样区域，常与CD21、CD81一起形成B细胞共受体，在活化状态下，其胞质中的C端发生磷酸化，引起Src-家族激酶的结合并募集磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)参与细胞增殖、分化和凋亡过程。其他与CD19互作的分子还包括CD82、补体受体2及VAV2，以更好完成其磷酸化等过程。[0003]从最早期的、可识别性B淋巴细胞阶段到分化、发育的B淋巴细胞以及滤泡树突状细胞都有CD19表达，但是在成熟期B淋巴细胞和骨髓中的浆细胞中CD19无表达或微弱表达，T细胞和巨噬细胞中也不表达。对肿瘤细胞，CD19表达于大多数B细胞淋巴瘤/白血病(B淋巴母细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病)的B细胞表面，在浆细胞肿瘤和T细胞淋巴瘤中则不表达，这也可与CD56阳性一并作为浆细胞肿瘤增生的标志。靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)T细胞在治疗B细胞恶性肿瘤患者已经取得了明显的效果。此外，CD19还参与自身免疫病的发病过程，因此也是潜在的治疗靶点，FDA已授予阿斯利康(Ast