抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113234155A(43)申请公布日2021.08.10(21)申请号202110518497.6G01N33/574(2006.01)(22)申请日2021.05.12G01N33/577(2006.01)C12N5/20(2006.01)(83)生物保藏信息C12N15/70(2006.01)CGMCCNo.207752020.09.17C12R1/19(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人付利利陈滢杨清海陈惠玲王小亚(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆林祥翔(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C07K16/18(2006.01)序列表3页附图1页(54)发明名称抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可以识别人Calponin抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取Calponin蛋白C末端的第1位至第297位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含Calponin蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗Calponin蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株24H5,以及由该细胞株所分泌的抗Calponin蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达Calponin蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN113234155ACN113234155A权利要求书1/1页1.一种抗Calponin单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQID4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID5所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的编码DNA序列为SEQID2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的编码DNA序列为SEQID3所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别Calponin蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG2b亚型单克隆抗体。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO20775的杂交瘤细胞株产生。6.一种抗Calponin蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含Calponin蛋白片段及组氨酸蛋白标签；所述Calponin蛋白片段为Calponin蛋白的第1位至第297位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。7.一株分泌抗Calponin蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株24H5，所述细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO20775。8.权利要求1‑5任一所述的单克隆抗体在Calponin蛋白免疫检测中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。10.一种Calponin蛋白免疫组化检测试剂，其特征在于，所述免疫组化检测试剂含有权利要求1所述的抗Calponin蛋白单克隆抗体为其有效成分。2CN113234155A说明书1/6页抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。背景技术[0002]Calponin(CaP)，首次于1986年由Takahashi等在鸡胃平滑肌中发现，分子量约为34‑kDa(292‑330个氨基酸)的蛋白质，结合在细肌丝上，作为一种肌动蛋白结合蛋白参与平滑肌的收缩。其分子结构主要由氨基末端的单一CH结构域(calponinhomologydomain)和羧基末端calponin样重复模体(calponin‑likerepeat,CLR)的单拷贝或多拷贝的串联重复序列组成。CaP是分化标志蛋白,在分化型平滑肌细胞中大量表达,它通过与细胞骨架蛋白肌动蛋白相结合,参与肌动蛋白细胞骨架重构,具有多种生物学功能,其表达改变与许多疾病的发生发展密切相关。[0003]Calponin既表达于平滑肌细胞，也表达于肌纤维母细胞及肌上皮细胞，常被用于检测乳腺、