引物、引物组合、试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108624687A(43)申请公布日2018.10.09(21)申请号201810447833.0C12N15/11(2006.01)(22)申请日2018.05.11(71)申请人南京先声医学检验有限公司地址210042江苏省南京市玄武区玄武大道699-18号32幢申请人江苏先声医学诊断有限公司北京先声医学检验实验室有限公司(72)发明人王阳刘进马冉冉崔欢喜任用(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人张柳赵青朵(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/686(2018.01)权利要求书1页说明书17页序列表3页附图11页(54)发明名称引物、引物组合、试剂盒及其应用(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物、引物组合、试剂盒及其应用。本发明利用多种混合引物一次实时荧光定量PCR(real-timePCR)在cDNA水平上特异性检出至少15种NPM1突变。主要针对AML治疗后微小残留病变的检测，也可用于初诊患者鉴定有无NPM1突变。CN108624687ACN108624687A权利要求书1/1页1.引物，其特征在于，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：Ⅰ、具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；Ⅱ、具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；III、与SEQIDNO:1所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互补序列。2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物具有SEQIDNO:2～6任意一项所示的核苷酸序列。3.引物组，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的引物、顺向通用引物和/或内对照基因的引物；所述顺向通用引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：V、具有SEQIDNO:7所示的核苷酸序列；VI、具有SEQIDNO:7所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；VII、与SEQIDNO:7所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；VIII、如V、VI或VII所示序列的互补序列。4.引物组和探针的组合，其特征在于，包括如权利要求3所述的引物组和探针，所述探针具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：XII、具有SEQIDNO:10或11所示的核苷酸序列；XIII、具有SEQIDNO:10或11所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；XIV、与SEQIDNO:10或11所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；XV、如XII、XIII或XIV所示序列的互补序列。5.如权利要求1或2所述的引物或如权利要求3所述的引物组或如权利要求4所述的引物组和探针的组合在扩增和/或检测NPM1基因或其突变中的应用。6.如权利要求1或2所述的引物或如权利要求3所述的引物组或如权利要求4所述的引物组和探针的组合在制备检测急性髓细胞白血病、急性髓细胞白血病治疗后的微小残留病变、以及初诊患者鉴定有无NPM1突变的试剂盒中的应用。7.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的引物或如权利要求3所述的引物组或如权利要求4所述的引物组和探针的组合以及可接受的试剂。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，如权利要求1或2所述的引物的浓度为4～8pmol/μl。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述内对照基因的引物的浓度为4～8pmol/μl；所述顺向通用引物的浓度为20～40pmol/μl；所述的探针的浓度为4～8pmol/μl。10.一种检测NPM1突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获得待测样本的核苷酸；步骤2：取所述核苷酸，利用权利要求3所述引物组进行扩增，或与如权利要求8所述的试剂盒中的试剂混合，扩增，根据扩增结果获得检测结果。2CN108624687A说明书1/17页引物、引物组合、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物、引物组合、试剂盒及其应用。背景技术[0002]微小残留病变(MRD)是指血液系统肿瘤在接受治疗后获得组织形态学缓解，无临床症状但仍然存在在体内的亚显微镜病变。目前临床多用PCR和流式细胞仪进行检测。[0003]急性髓细胞白血病(AML)是成人白血病中最大一个种类，约占50％-70％，是重要的致死性疾病。近年来随着治疗方法的不断改进，获得形态学缓解的患者比率越来越高，但大部分病人在获得缓解后仍然复发。了解获得显微镜下的形态学缓解患者体内是否存在肿瘤细胞，进而决定是否需要进一步治疗，是预防复发的关键步骤。然而，由于AML的异质性，对于缓解期的AML患者进行MRD检测没有统一的方法。