同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的引物及探针组合物、检测方法、试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114934136A(43)申请公布日2022.08.23(21)申请号202210571115.0C12N15/11(2006.01)(22)申请日2022.05.24C12R1/93(2006.01)(71)申请人武汉珈创生物技术股份有限公司地址430000湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器3.1期4栋1层、2层、3层(72)发明人张若璇王明珍徐国东袁冰郝瑶韩玲玲(74)专利代理机构北京汇泽知识产权代理有限公司11228专利代理师吴慧珺(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的引物及探针组合物、检测方法、试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于病毒检测技术领域，具体提供了一种同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的引物及探针组合物，包括检测小鼠微小病毒的引物和探针，检测小鼠胸腺病毒的引物和探针。本发明还提供了包括上述引物及探针组合物的试剂盒，以及同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的方法。本发明提供的这种引物及探针组合物、试剂盒及方法可以特异性扩增出MVM和MTLV这两种病毒，且不与其它病毒核酸发生交叉反应，也不会与样本中可能存在的各种常用细胞系基因组发生交叉反应，特异性良好、敏感性高、重复性好，弥补了现有技术中小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒必须分别进行检测的短板，为啮齿类动物生物制品的外源病毒污染防控提供了良好的检测手段。CN114934136ACN114934136A权利要求书1/1页1.一种同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的引物及探针组合物，包括检测小鼠微小病毒的上游引物P‑MVM‑F、下游引物P‑MVM‑R和探针MVM‑P，检测小鼠胸腺病毒的上游引物P‑MTLV‑F、下游引物P‑MTLV‑R和探针MTLV‑P，其特征在于：所述上游引物P‑MVM‑F的序列为5’‑AACTTACTTCTTCTGCTGCACA‑3’；所述下游引物P‑MVM‑R的序列为5’‑AGACCCAGTAGAAACACCAACC‑3’；所述探针MVM‑P的序列为5’‑(FAM)‑CCAACCTGA/iXNA_C/RGCGRAAACG‑(BHQ)‑3’；所述上游引物P‑MTLV‑F的序列为5’‑AGGACTTGCTTTACCTGTTG‑3’；所述下游引物P‑MTLV‑R的序列为5’‑ATACATACCTCTCCAAGAACCG‑3’；所述探针MTLV‑P的序列为5’‑(FAM)‑CCAACCTGA/iXNA_C/RGCGRAAACG‑(BHQ)‑3’；其中/iXNA_A/表示对碱基A进行锁核酸修饰；/iXNA_T/表示对碱基T进行锁核酸修饰；/iXNA_G/表示对碱基G进行锁核酸修饰；/iXNA_C/表示对碱基C进行锁核酸修饰。2.一种同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物及探针组合物；所述上游引物P‑MVM‑F、所述下游引物P‑MVM‑R、所述上游引物P‑MTLV‑F和所述下游引物P‑MTLV‑R混合后形成混合引物，所述探针MVM‑P和所述探针MTLV‑P混合后形成混合探针。3.如权利要求2所述的同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：所述混合引物中所述上游引物P‑MVM‑F的浓度为0.1‑1mM，所述下游引物P‑MVM‑R的浓度为0.1‑1mM，所述上游引物P‑MTLV‑F的浓度为0.1‑1mM，所述下游引物P‑MTLV‑R的浓度为0.1‑1mM。4.如权利要求2所述的同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：所述混合探针中所述探针MVM‑P的浓度为0.05‑1mM，所述探针MTLV‑P的浓度为0.05‑1mM。5.如权利要求2所述的同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：还包括QPCR反应预混液。6.如权利要求2所述的同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：还包括定量标准品；所述定量标准品为PUC57‑MVM和PUC57‑MTLV质粒混合物。7.如权利要求2所述的同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照；所述阳性对照为灭活的MVM毒株和MTLV假病毒毒株混合物。8.如权利要求1所述的引物及探针组合物或如权利要求2‑7任意一项所述的试剂盒在检测啮齿类生物制品中小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒污染的应用。9.一种同时检测小鼠微小病毒和小鼠胸腺病毒的荧光定量QPCR方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样本的DNA模板；(2)利用如权利要求1所述的引物及探针组合物对DNA模板进行荧