一种抗体偶联药物的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109692331A(43)申请公布日2019.04.30(21)申请号201910011658.5(22)申请日2019.01.07(71)申请人合肥瀚科迈博生物技术有限公司地址230027安徽省合肥市蜀山区黄山路443号中国科技大学西区生物楼(72)发明人程联胜赵群刘兢张中伟(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61K38/07(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表6页附图6页(54)发明名称一种抗体偶联药物的制备方法(57)摘要本发明公开了一种抗体偶联药物的制备方法。该制备方法包括如下步骤：将抗人ErbB2双特异性抗体和还原剂混合，进行还原反应；取还原后的反应体系，用pH7.4、0.01M的PBS缓冲液稀释2-4倍，将稀释液和vc-MMAE混合，进行偶联反应，得到抗体偶联药物。抗人ErbB2双特异性抗体的重链的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，轻链的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。实验证明，抗体偶联药物和T-DM1均可抑制SKBR3、NCI-N87、HCC1954、MDA-MB-453和KPL-4的增殖，且抑制效果基本一致；抗体偶联药物抑制JIMT-1增殖的效果显著高于T-DM1。本发明具有重要的应用价值。CN109692331ACN109692331A权利要求书1/1页1.一种抗体偶联药物的制备方法，包括如下步骤：(1)将抗人ErbB2双特异性抗体和还原剂混合，还原；(2)将完成步骤(1)的体系稀释2-4倍，搅拌1-3h；(3)将完成步骤(2)的体系和vc-MMAE混合，偶联；所述抗人ErbB2双特异性抗体的重链的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，轻链的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，抗人ErbB2双特异性抗体和还原剂的摩尔比为1:(4-5)；还原的时间为50-70min。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述还原剂为TCEP。4.如权利要求1至3任一所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述“将完成步骤(1)的体系稀释2-4倍”为将完成步骤(1)的体系用pH7.2-7.6、0.005-0.015M的PBS缓冲液稀释2-4倍。5.如权利要求1至4任一所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，vc-MMAE和所述完成步骤(2)的体系中已还原的抗人ErbB2双特异性抗体的摩尔比为(6-8):1；偶联的时间为20-40min。6.如权利要求1至5任一所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括步骤(4)：将完成步骤(3)的体系进行脱盐。7.权利要求1至6任一所述的制备方法制备的抗体偶联药物。8.权利要求7所述抗体偶联药物的应用，为a1)-a5)中的至少一种：a1)抑制肿瘤细胞增殖；a2)抑制肿瘤生长；a3)治疗和/或预防癌症；a4)制备抗肿瘤药物；a5)制备肿瘤细胞增殖抑制剂。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述癌症为乳腺癌和/或胃癌；所述肿瘤细胞为JIMT-1、SKBR3、NCI-N87、HCC1954、MDA-MB-453和KPL-4中的至少一种；所述肿瘤为移植瘤。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述乳腺癌为Herceptin耐药的乳腺癌或Herceptin敏感的乳腺癌。2CN109692331A说明书1/9页一种抗体偶联药物的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医学领域，具体涉及一种抗体偶联药物的制备方法。背景技术[0002]人ErbB2蛋白(简称ErbB2，又称HER2或P185)是一种糖蛋白，属于I型受体酪氨酸激酶家族中的表皮生长因子受体(ErbB/HER)家族。ErbB2与肿瘤的发生发展密切相关，在多种癌症(如乳腺癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌)中都可以检测到ErbB2原癌基因或ErbB2的高表达。同时，ErbB2还经常被用来作为一些肿瘤(如乳腺癌)重要的预后判定指标，ErbB2高表达的肿瘤往往预后效果差。由此可见，ErbB2已经成为肿瘤靶向治疗的重要靶点之一。[0003]肿瘤的靶向治疗是治疗肿瘤的一个重要手段。一个成功的策略是利用单克隆抗体特异性识别肿瘤细胞表面的抗原决定簇，从而靶向杀死癌细胞。据此，可以利用抗体靶向肿瘤细胞表面的ErbB2来特异性的杀死肿瘤细胞。曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名为Herceptin)和帕妥珠单抗(Pertuzumab，商品名Perjeta)均为抗ErbB2人源化单克隆抗体。“曲妥珠单抗与化疗联用”或“曲妥珠单抗与帕妥珠联