用于选择产生多肽的细胞的改进方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109790214A(43)申请公布日2019.05.21(21)申请号201780060072.7(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所1(22)申请日2017.09.271247代理人凌立黄革生(30)优先权数据16191586.32016.09.29EP(51)Int.Cl.C07K16/00(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N15/85(2006.01)2019.03.28(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2017/0744812017.09.27(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/060239EN2018.04.05(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人E·科佩茨基O·普罗特奈尔权利要求书2页说明书43页序列表15页附图13页(54)发明名称用于选择产生多肽的细胞的改进方法(57)摘要本文报道按5’至3’方向包含以下的核酸：i)不含符合读框的翻译终止密码子的编码目的多肽的第一核酸片段，ii)与该第一核酸片段有效连接的第二核酸片段，其始于5免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号，和iii)与该第二核酸有效连接的第三核酸片段，其编码跨膜10结构域的至少一个片段，其中第二核酸片段在其3’端具有核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAG(SEQIDNO:29)或TGACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:14)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:31)。CN109790214ACN109790214A权利要求书1/2页1.核酸，其具有核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAG(SEQIDNO:29)、TGACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:14)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:31)。2.核酸，其具有核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:30)、TGACCACGCCAATCGTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:15)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:32)。3.核酸，其按5’至3’方向包含：i)不含符合读框的翻译终止密码子的编码目的多肽的第一核酸片段；ii)与所述第一核酸片段有效连接的第二核酸片段，其始于免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号；iii)与所述第二核酸有效连接的第三核酸片段，其编码跨膜结构域的至少一个片段；其中第二核酸片段在其3’端具有核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAG(SEQIDNO:29)、TGACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:14)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQIDNO:31)。4.核酸，其按5’至3’方向包含：i)不含符合读框的翻译终止密码子的编码目的多肽的第一核酸片段；ii)与所述第一核酸片段有效连接的第二核酸片段，其始于免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号；iii)与所述第二核酸有效连接的第三核酸片段，其编码跨膜结构域的至少一个片段；其中核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:30)、TGACCACGCCAATCGTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:15)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAGAGCTG(SEQIDNO:32)与第二核酸片段和第三核酸片段重叠。5.权利要求2至4中任一项的核酸，其中始于免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号的第二核酸进一步在聚腺苷酸化信号的5’包含编码选择标记的核酸。6.权利要求2至5中任一项的核酸，其中目的多肽是免疫球蛋白重链。7.权利要求1至6中任一项的核酸，其中核酸包含在表达盒内。8.权利要求3至7中任一项的核酸，其中第二核酸片段包含仅一个5’剪接供体位点和仅一个3’剪接受体位点。9.权利要求3至8中任一项的核酸，其中第二核酸片段是在编码免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的外显子