使用凋亡抗性细胞系产生多肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113631714A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号201980084601.6(74)专利代理机构北京坤瑞律师事务所11494(22)申请日2019.12.19代理人岑晓东(30)优先权数据(51)Int.Cl.62/784,0512018.12.21USC12N15/67(2006.01)C07K14/47(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N5/071(2006.01)2021.06.18(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2019/0674552019.12.19(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/132231EN2020.06.25(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人T·A·阿瑞纳A·W·黄权利要求书3页说明书33页附图30页(54)发明名称使用凋亡抗性细胞系产生多肽的方法(57)摘要本文中提供包含人Bax和Bak基因中的每一者中的功能丧失突变的细胞系(例如HEK293细胞系)，以及包含所述细胞系的细胞培养物。所述细胞系和/或细胞培养物可用于例如产生重组多肽(诸如抗体或其抗原结合片段)或病毒载体的方法中。CN113631714ACN113631714A权利要求书1/3页1.一种产生重组多肽的方法，其包括：在适合产生所述多肽的条件下培养HEK293细胞系，所述HEK293细胞系包含(a)人Bax和Bak基因中的每一者中的功能丧失突变以及(b)编码所述重组多肽的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述重组多肽的所述多核苷酸为染色体外多核苷酸。3.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述重组多肽的所述多核苷酸被整合至所述HEK293细胞系的染色体中。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述重组多肽为抗体或其抗原结合片段、抗原、酶或疫苗。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述重组多肽为抗体或其抗原结合片段。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述细胞系在7天内以约650mg/L的效价产生所述重组多肽。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其进一步包括从所述细胞系分离所述重组多肽。8.一种产生病毒载体的方法，其包括：在适合产生所述病毒载体的条件下培养HEK293细胞系，所述HEK293细胞系包含(a)人Bax和Bak基因中的每一者中的功能丧失突变；(b)病毒基因组；以及(c)一种或多种编码病毒衣壳的多核苷酸。9.根据权利要求8所述的方法，其进一步包括从所述细胞系分离所述病毒载体。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在细胞培养基中培养所述细胞系。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中在介于约6.7与约7.3之间的pH培养所述细胞系。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在约30％的溶解氧(DO)设定点培养所述细胞系。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中在赋予约13W/m3的功率输入/体积(P/V)的搅拌速率培养所述细胞系。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中以至少约10L的体积培养所述细胞系。15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中以至少约25L的体积培养所述细胞系。16.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中在35L生物反应器培养物中培养所述细胞系。17.根据权利要求16所述的方法，其包括在35L生物反应器培养物中培养所述细胞系60天。18.根据权利要求17所述的方法，其中在35L生物反应器培养物中培养所述细胞系60天之后，所述细胞系维持至少85％细胞存活率。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中在所述35L生物反应器培养物中以介于约20L与约35L之间的工作体积培养所述细胞系。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在分批饲喂培养条件下培养所述细2CN113631714A权利要求书2/3页胞系。21.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在灌流培养条件下培养所述细胞系。22.一种细胞培养物，其包含细胞培养基和多个HEK293细胞，其中所述多个细胞中的每个细胞包含人Bax和Bak基因中的每一者中的功能丧失突变。23.根据权利要求22所述的细胞培养物，其中所述细胞处于足以用于35L生物反应器培养物的细胞密度。24.根据权利要求23所述的细胞培养物，其中所述细胞在足以用于35L生物反应器培养物的细胞密度维持60天。25.根据权利要求24所述的细胞培养物，其中在35L生物反应器培养物中培养所述细胞系60天之后，所述细胞系维持至少85％细胞存活率。26.根据权利要求22至25中任一项所述的细胞培养物，其中所述多个细胞在暴露于2.6