能用于过继性细胞疗法的多肽.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104379599A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.02.25(21)申请号201380029374.X代理人张文辉(22)申请日2013.04.11(51)Int.Cl.(30)优先权数据C07K14/705(2006.01)1206559.52012.04.13GBC12N15/62(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2014.12.03(86)PCT国际申请的申请数据PCT/GB2013/0509352013.04.11(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/153391EN2013.10.17(71)申请人UCL商务股份有限公司地址英国伦敦(72)发明人M.普利B.菲利普(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105权利要求书2页说明书15页附图15页(54)发明名称能用于过继性细胞疗法的多肽(57)摘要本发明提供具有下式的多肽：St-R1-S1-Q-S2-R2，其中St是柄序列，当所述多肽在靶细胞表面表达时，其导致R和Q表位从细胞表面伸出；R1和R2是利妥昔单抗结合表位，其各自具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNo.1，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15和16或其保留利妥昔单抗结合活性的变体；S1和S2是任选的间隔序列，其可以是相同或不同的；且Q是具有如SEQIDNo.2所示氨基酸序列的QBEnd10结合表位或保留QBEnd10结合活性的其变体。本发明还提供编码这类多肽的核酸序列及其在过继性细胞转移中的用途。CN104379599ACN104379599A权利要求书1/2页1.一种具有下式的多肽：St-R1-S1-Q-S2-R2其中St是柄序列，当所述多肽在靶细胞表面表达时，该柄序列导致R和Q表位从所述细胞表面伸出；R1和R2是利妥昔单抗结合表位，它们各自具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNo.1，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15和16或其保留利妥昔单抗结合活性的变体；S1和S2是任选的间隔序列，其可以是相同或不同的；且Q是具有如SEQIDNo.2所示氨基酸序列的QBEnd10结合表位或保留QBEnd10结合活性的其变体。2.根据权利要求1的多肽，其中R1和R2之间的距离过长使得所述多肽不能同时结合利妥昔单抗的两个抗原结合位点。3.根据权利要求2的多肽，其中所述间隔序列S1和S2具有至少约10个氨基酸的联合长度。4.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中R1和R2之间的距离超过5.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述柄序列能从CD8alpha衍生。6.根据权利要求5的多肽，其中所述柄序列包含如SEQIDNo.3显示的氨基酸序列。7.根据前述权利要求中任一项的多肽，其包含如SEQIDNo.4显示的序列或其变体，该变体与以SEQIDNo.4显示的序列具有至少80％同一性，且该变体(i)结合QBEND10；(ii)结合利妥昔单抗，和(iii)当在细胞表面上表达时，在利妥昔单抗存在的情况下诱导补体介导的细胞杀伤。8.一种融合蛋白，其包含与目的蛋白质(POI)融合的根据前述权利要求中任一项的多肽。9.根据权利要求8的融合蛋白，其中所述POI是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。10.根据权利要求8或9的融合蛋白，其包含在所述多肽与所述目的蛋白质之间的自身切割肽。11.一种核酸序列，其能编码根据权利要求1至7中任一项的多肽或权利要求8至10中任一项的融合蛋白。12.一种包含根据权利要求11的核酸序列的载体。13.根据权利要求12的载体，其还包含目的转基因。14.根据权利要求13的载体，其中所述目的转基因编码嵌合抗原受体或T细胞受体，从而当使用所述载体转导靶细胞时，所述靶细胞共表达根据权利要求1至7中任一项的多肽和嵌合抗原受体或T细胞受体。15.一种表达根据权利要求1至7中任一项的多肽的细胞。16.根据权利要求15的细胞，其在所述细胞表面上共表达所述多肽和POI。17.一种包含根据权利要求11的核酸序列的细胞。18.根据权利要求15至17中任一项的细胞，其为T细胞。2CN104379599A权利要求书2/2页19.一种用于制备根据权利要求15至18中任一项的细胞的方法，其包括用根据权利要求12至14中任一项的载体转导或转染细胞的步骤。20.一种用于研究基因治疗方法的转导效率的方法，其包括在用根据权利要求12至14中任一项的载体转染或转导的细胞表面上检测QBEnd10结合表位表达的步骤。21.一种用于选择表达POI的细胞的方法，其包括以下步骤：(i)在用根据权利要求13的载体转染或转导的细胞表面上检测QBEnd10结合表位的表达；并(ii)选出鉴定