用于新颖抗原结合模块的特异性测试的CAR-T细胞测定法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111492243A(43)申请公布日2020.08.04(21)申请号201880081668.XC·约斯特V·普尔科(22)申请日2018.12.20(74)专利代理机构北京坤瑞律师事务所11494(30)优先权数据代理人岑晓东17209198.52017.12.21EP(51)Int.Cl.(85)PCT国际申请进入国家阶段日G01N33/50(2006.01)2020.06.17G01N33/574(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2018/0860672018.12.20(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/122060EN2019.06.27(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人C·克莱因E·梅斯纳L·J·哈尼施W·徐权利要求书1页说明书56页C·L·S·德隆D·达布罗夫斯基序列表58页附图13页(54)发明名称用于新颖抗原结合模块的特异性测试的CAR-T细胞测定法(57)摘要本发明一般性涉及使用细胞培养物的特异性测定法,特别是用于测试不同型式的抗原结合模块的嵌合抗原受体(CAR)表达性报告T(CAR-T细胞)测定法。而且,本发明涉及用包含靶抗原结合模块的改造的嵌合抗原受体(CAR)转染/转导的CAR-T细胞的用途,该靶抗原结合模块能够特异性结合靶抗原,例如肿瘤相关抗原。CN111492243ACN111492243A权利要求书1/1页1.一种用于评估抗原结合模块的特异性的方法,其包含下述步骤:a)提供对靶抗原特异性的抗原结合模块；b)生成嵌合抗原受体(CAR)表达性报告T(CAR-T)细胞,其通过:i.将该抗原结合模块转移入与应答元件可操作偶联的CAR载体系统；和ii.将该CAR载体系统转染入包含在该应答元件控制下的报告基因的报告T细胞；c)使该报告CAR-T细胞与在表面上包含该靶抗原的靶细胞接触,特别是其中该靶细胞是癌细胞；和d)通过测定该报告基因的表达来测定T细胞激活以建立该抗原结合模块的特异性。2.权利要求1的方法,其中该抗原结合模块是Fab片段,特别是自噬菌体展示文库筛选衍生的Fab片段。3.权利要求1或2的方法,其中该抗原结合模块包含可变重链域(VH)和可变轻链域(VL)且其中将该抗原结合模块的VH和VL域的编码多核苷酸序列转移至该CAR载体系统。4.权利要求1至3任一项的方法,其中该CAR载体系统编码包含Fab或交叉Fab片段,锚定跨膜域和至少一个细胞内信号传导和/或共信号传导域的CAR。5.权利要求4的方法,其中该靶抗原对该报告CAR-T细胞的结合导致该细胞内信号传导和/或共信号传导域的激活。6.权利要求4或5任一项的方法,其中该细胞内信号传导域的激活导致该应答元件的激活。7.依照权利要求1至6任一项的方法,其中该应答元件的激活导致该报告基因的表达。8.依照权利要求1至7任一项的方法,其中该报告基因编码发光蛋白,特别是荧光蛋白。9.依照权利要求1至8任一项的方法,其中该靶抗原是细胞表面受体。10.依照权利要求1至9任一项的方法,其中该靶抗原是与人主要组织相容性复合物(MHC)的分子结合的肽。11.依照权利要求10的方法,其中该抗原结合模块是T细胞受体样(TCRL)抗原结合模块。12.依照权利要求1至11任一项的方法,其中在该靶细胞存在下高水平的该报告基因的表达和在该靶细胞缺失下低水平的该报告基因的表达指示该抗原结合模块的高特异性。13.依照权利要求1至12任一项的方法,其中在该靶细胞存在下高水平的该报告基因的表达和在该靶细胞缺失下低水平的该报告基因的表达指示包含该抗原结合模块的T细胞双特异性(TCB)抗体的高特异性。14.依照权利要求1至13任一项的方法,其中该方法是体外方法。15.一种用于生成TCB抗体的方法,其中该TCB抗体型式包含对靶抗原特异性的第一抗原结合模块和能够特异性结合T细胞激活性受体的第二抗原结合模块,其中该第一抗原结合模块是依照权利要求1至14任一项的方法选择的。16.权利要求15的方法,其中该T细胞激活性受体是CD3。2CN111492243A说明书1/56页用于新颖抗原结合模块的特异性测试的CAR-T细胞测定法发明领域[0001]本发明一般性涉及使用细胞培养物的特异性测定法,特别是用于测试不同型式的抗原结合模块的嵌合抗原受体(CAR)表达性报告T(CAR-T细胞)测定法。而且,本发明涉及用包含靶抗原结合模块的改造的嵌合抗原受体(CAR)转染/转导的CAR-T细胞的用途,该靶抗原结合模块能够特异性结合靶抗原,例如肿瘤相关抗原。[0002]发明背景[0003]化疗直到现在仍然是癌症的最常用治疗之一。另外,基于抗体的疗法在过去15年里得到发展,现在