多重核酸检测方法、组合及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112111566A(43)申请公布日2020.12.22(21)申请号202011008766.6(22)申请日2020.09.23(71)申请人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人赵雨航詹浩淼黄梅(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270代理人陈万青张颖玲(51)Int.Cl.C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书3页说明书21页序列表6页附图16页(54)发明名称多重核酸检测方法、组合及试剂盒(57)摘要本发明涉及多重核酸检测的方法、组合及试剂盒。该方法包括：一种多重核酸检测的方法，包括以下步骤：将含有第一引物组和第一探针的组合与来自受试者的样本进行混合；对所述样本中可能存在的靶序列进行扩增；在对应的检测通道内对扩增后产物进行熔解曲线分析；以及根据所述熔解曲线分析的结果，判断是否存在靶标中的一种或更多种。CN112111566ACN112111566A权利要求书1/3页1.一种多重核酸检测的方法，包括以下步骤：将含有第一引物组和第一探针的组合与来自受试者的样本进行混合；对所述样本中可能存在的靶序列进行扩增；在对应的检测通道内对扩增后产物进行熔解曲线分析；以及根据所述熔解曲线分析的结果，判断是否存在靶标中的一种或更多种，其中，所述第一引物组包括针对第一靶标的上游引物和下游引物，以及针对第二靶标的上游引物和下游引物，其中，所述第一靶标的上游引物或下游引物包括位于靶序列结合区上游的第一信号检测区，其中，所述第二靶标的上游引物或下游引物包括位于靶序列结合区上游的第二信号检测区，其中，所述第一和第二信号检测区被设计成不与靶序列发生互补配对，并且其中，所述第一探针的全部或部分序列与所述第一和第二信号检测区相同，从而能够分别与所述第一和第二信号检测区的互补序列形成双链结构；所述第一探针携带有第一检测基团和第二检测基团，在整合至所述双链结构后，所述第一检测基团和第二检测基团能够因此产生信号的变化。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述组合进一步包括第二引物组和第二探针，所述第二引物组包括针对第三靶标的上游引物和下游引物，以及针对第四靶标的上游引物和下游引物，其中，所述第三靶标的上游引物或下游引物包括位于靶序列结合区上游的第三信号检测区；所述第四靶标的上游引物或下游引物包括位于靶序列结合区上游的所述第四信号检测区，其中，所述第三和第四信号检测区被设计成不与靶序列发生互补配对，并且其中，所述第二探针的全部或部分序列与所述第三和第四信号检测区相同，从而能够分别与所述第三和第四信号检测区的互补序列形成双链结构；所述第二探针携带有第三检测基团和第四检测基团，在整合至所述双链结构后，所述第三检测基团和第四检测基团能够因此产生信号的变化，并且所述第二探针所产生的信号与第一探针所产生的信号对应不同的检测通道。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一探针和第二探针选自由以下项组成的组：在单链状态下因分子柔性成卷曲状的寡核苷酸、在单链状态下能够形成发夹结构的寡核苷酸、在单链状态下能够形成茎环结构的寡核苷酸、在单链状态下能够形成假结结构的寡核苷酸，和在单链状态下能够形成三螺旋结构的寡核苷酸。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述第一检测基团和第二检测基团相距5-25个碱基，且不位于3’末端；并且所述第三检测基团和第四检测基团相距5-25个碱基，且不位于3’末端。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第一探针能够对第一引物组的扩增产物进行扩增，而不能对其它引物组的扩增产物进行扩增；第二探针能够对第二引物组的扩增产物进行扩增，而不能对其它引物组的扩增产物进行扩增。6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述信号检测区与其所位于的引物上的靶序列结2CN112111566A权利要求书2/3页合区之间间隔0-40碱基。7.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第一信号检测区与所述第二信号检测区相同。8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述间隔被设计成使得所述第一探针的不同扩增产物具有不同的熔解温度；所述间隔被设计成使得所述第二探针的不同扩增产物具有不同的熔解温度。9.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述第一探针能够与第一引物组的扩增产物杂交，而不能与其他引物组的扩增产物进行杂交；所述第二探针能够与第二引物组的扩增产物杂交，而不能与其他引物组的扩增产物进行杂交；并且所述第一探针和所述第二探针的3’末端被设计成不能作为引物延伸。10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述第一探针和第二探针上的第一检测基团或第二检测基团位于其3’末端。11.根据权利要求9所述的方法，