检测核酸的组合、方法及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114008217A(43)申请公布日2022.02.01(21)申请号202080042531.0C12Q1/6851(2018.01)(22)申请日2020.09.23C12N15/11(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2021.12.10(86)PCT国际申请的申请数据PCT/CN2020/1171632020.09.23(71)申请人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人赵雨航黄秋萍何辉煌(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270代理人王子晔徐川(51)Int.Cl.权利要求书2页说明书17页C12Q1/6886(2018.01)序列表3页附图2页(54)发明名称检测核酸的组合、方法及试剂盒(57)摘要本发明涉及检测核酸的组合、方法及试剂盒。该组合包括：上游引物，其3’端设置有靶序列结合区，所述靶序列结合区的3’末端能够与靶序列的特异检测位点互补；下游引物，其3’端设置有靶序列结合区，所述靶序列结合区的3’末端能够与同一特异检测位点互补；和信号寡核苷酸，所述信号寡核苷酸修饰有第一检测基团和第二检测基团，其中，所述第一检测基团与第二检测基团通过距离的变化产生信号的变化。CN114008217ACN114008217A权利要求书1/2页1.一种用于检测核酸的组合，包括：上游引物，其3’端设置有靶序列结合区，所述靶序列结合区的3’末端能够与靶序列的特异检测位点互补；下游引物，其3’端设置有靶序列结合区，所述靶序列结合区的3’末端也能够与同一特异检测位点互补；和信号寡核苷酸，所述信号寡核苷酸修饰有第一检测基团和第二检测基团，其中，所述第一检测基团与第二检测基团通过距离的变化产生信号的变化，其中，所述信号寡核苷酸被设计成所述上游引物和/或下游引物的一部分且位于所述靶序列结合区的上游；或者，所述上游引物和/或下游引物在靶序列结合区的上游进一步包括信号检测区，所述信号寡核苷酸被设计成独立于所述上游引物和/或下游引物且与所述信号检测区具有相同的序列，并且其中，所述信号检测区位于所述上游引物和/或下游引物的靶序列结合区的上游，并且被设计成不能与靶序列发生互补配对。2.根据权利要求1所述的组合，其中，所述上游引物和/或下游引物在靶序列结合区的上游进一步包括信号检测区，所述信号寡核苷酸被设计成独立于所述上游引物和/或下游引物，所述信号寡核苷酸被设计成自5’至3’依次包括第一茎区、环区、第二茎区和锚定区，其中，所述第一茎区被设计成与第二茎区部分或完全互补，所述锚定区位于所述信号寡核苷酸的3’端且被设计成与所述信号检测区完全或部分相同，并且其中，所述第一检测基团修饰在所述第一茎区上，所述第二检测基团修饰在所述第二茎区上、所述第二茎区与锚定区之间或所述锚定区的非3’末端。3.根据权利要求2所述的组合，其中，所述第二茎区与锚定区之间存在1‑5个碱基间隔。4.根据权利要求2所述的组合，其中，所述第一检测基团位于所述第一茎区，而所述第二检测基团位于所述第二茎区与锚定区之间。5.根据权利要求1所述的组合，其中，所述上游引物和/或下游引物在靶序列结合区的上游进一步包括信号检测区，所述信号寡核苷酸被设计成独立于所述上游引物和/或下游引物，其中，所述信号寡核苷酸被设计成柔性寡核苷酸，并且其中，所述第一检测基团和第二检测基团位于所述信号寡核苷酸的非3’末端。6.根据权利要求5所述的组合，其中，所述第一检测基团和第二检测基团相距5‑25nt。7.根据权利要求1所述的组合，其中，所述上游引物和/或下游引物在靶序列结合区的上游进一步包括信号检测区，所述信号寡核苷酸被设计成独立于所述上游引物和/或下游引物，所述组合进一步包括第二引物，所述第二引物的全部或部分序列与所述信号检测区相同，并且其中，所述信号检测区上与所述信号寡核苷酸相同的区域位于与所述第二引物相同的区域的下游，并且其中，通过所述信号寡核苷酸的水解产生所述距离的变化。8.根据权利要求1所述的组合，其中，所述信号寡核苷酸被设计成所述上游引物和/或2CN114008217A权利要求书2/2页下游引物的一部分且位于所述靶序列结合区的上游，所述信号寡核苷酸自5’至3’依次包括第一茎区、环区和第二茎区，其中，所述第一茎区被设计成与第二茎区部分或完全互补，并且其中，所述第一检测基团位于第一茎区，而所述第二检测基团位于所述第二茎区。9.根据权利要求1‑8中任一项所述的组合，其中，所述特异检测位点是突变位点。10.一种检测核酸的方法，包括以下步骤：将权利要求1‑9中任一项所述的组合、扩增试剂与来自受试者的样本进行混合；对所述样本中可能存在的靶序列进行扩增；获得所产生的信号