一种基因分型检测用的质控品及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112662746A(43)申请公布日2021.04.16(21)申请号201910980422.2(22)申请日2019.10.15(71)申请人杭州百迈生物股份有限公司地址311228浙江省杭州市杭州大江东产业聚集区临江高新区纬五路3688号(72)发明人林源吉丁佳女(51)Int.Cl.C12Q1/6858(2018.01)C12Q1/6806(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称一种基因分型检测用的质控品及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种质控品及其制备方法，所述质控品为血液粗提物，包含白细胞和缓冲液，所述白细胞来自目标基因为杂合型的样本，同时荧光PCR测定获得的Ct值在预先设定的Ct值范围之内。本发明所述质控品及其制备方法能够用于血液直扩基因分型产品的有效质量控制，且质控品的精密度和稳定性均符合质控品的行业要求。CN112662746ACN112662746A权利要求书1/2页1.一种适用于基因分型产品的质控品，包括白细胞，其特征在于，所述白细胞由目标基因为杂合子的样本中分离获得。2.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，利用荧光PCR对质控品的Ct值进行测定，Ct值介于预先设定的质控品验证Ct值范围内。3.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，还包括缓冲液A，所述缓冲液A的配方包括：Tris-HCl:5-8mmol/LEDTA:0.5-1.5mmol/LNP-40:0.5-1％(体积质量百分比)BSA：0.1-0.5mg/ml。4.根据权利要求2所述的质控品，其特征在于，所述设定的质控品验证Ct值范围方法包括：对临床血样样本进行测序筛选出目标基因检测位点为杂合子的样本；筛选出白细胞浓度介于指定范围的杂合子样本，对杂合子样本进行处理，获得白细胞溶液，利用荧光PCR对所述白细胞溶液Ct值进行评估，确定预设的质控品验证Ct值范围。5.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，所述白细胞按如下方法获得：(1)在全血中加入纯化水或TE溶液，涡旋；(2)离心，使得白细胞沉降，移除上清，获得白细胞。6.一种适用于血液直扩基因分型产品的质控品的制备方法，包括质控品筛选条件的确认和质控品的制备，其特征在于，所述质控品筛选条件的确认步骤包括：首先设计并合成针对目的检测位点的测序引物；然后对临床血样样本进行测序筛选出目的检测位点为杂合子的样本；最后，筛选出白细胞浓度介于指定范围的杂合子样本，对杂合子样本进行处理，获得白细胞溶液，利用荧光PCR对所述白细胞溶液Ct值进行评估，确定预设的质控品验证Ct值范围；所述质控品制备：利用所述测序引物进行测序，筛选出白细胞浓度介于指定范围的杂合子样本，然后对所述杂合子样本进行处理，获得白细胞溶液，利用荧光PCR对所述白细胞溶液Ct值进行测定；如其Ct值介于所述预设的质控品验证Ct值范围，则作为所述包细胞溶液作为质控品进行后续应用；所述杂合子样本处理方法包括：(1)向全血样本中加入红细胞破裂试剂，使红细胞破裂，释放出血红素；(2)离心步骤(1)中获得的处理液，使白细胞沉淀，移除上清；(3)加入缓冲液A溶液重悬白细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述指定范围是指血样样本中的白细胞浓度范围为4×109-10×109个/L。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，用于荧光PCR的样本的处理方法包括：①在EDTA抗凝全血中加入5-10倍体积纯化水，涡旋30s；②12000×g离心1min，使得白细胞沉降，移除上清；③加入全血等体积的缓冲液A溶液重悬。9.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，缓冲液A的配方包括：5-8mmol/L的Tris-HCl，0.5-1.5mmol/L的EDTA，0.5-1％的NP-40，0.1-0.5mg/ml的BSA。10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，测序所用模板选自以基因组DNA为模2CN112662746A权利要求书2/2页板或以血液为模板。3CN112662746A说明书1/9页一种基因分型检测用的质控品及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物制品技术领域，具体为一种基因分型检测提供质控品的制备方法。背景技术[0002]随着精准医疗的不断发展与推进，基因分型检测及其产品已经得到了临床诊断的认可，越来越多的基因分型产品陆续推出市面。随着该类产品的不断深化，其检测方法的控制显得尤为重要，因此，质控品的制备及应用逐渐受到关注与重视。目前对于基因分型检测产品，其检测目标主要有两种，一是基因组DNA，二是血液或血液的粗提物。本发明则主要针对以血液或血液粗提物为检测标的方法或产品。对于这类产品，以往采用的质控品