一种促进软骨形成的透明质酸水凝胶的制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113143967A(43)申请公布日2021.07.23(21)申请号202110036160.1A61K47/36(2006.01)(22)申请日2021.01.12A61K47/18(2006.01)A61P19/04(2006.01)(66)本国优先权数据C08F299/00(2006.01)202110018559.72021.01.07CNC08F2/48(2006.01)(71)申请人北京大学口腔医学院C08F8/30(2006.01)地址100081北京市海淀区中关村南大街22号(72)发明人魏世成滕彬宏黑玉(74)专利代理机构北京万思博知识产权代理有限公司11694代理人刘冀(51)Int.Cl.A61K35/28(2015.01)A61K9/06(2006.01)A61K47/34(2017.01)权利要求书1页说明书13页附图9页(54)发明名称一种促进软骨形成的透明质酸水凝胶的制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种促进软骨形成的透明质酸水凝胶的制备方法，包括以下步骤：(1)功能化透明质酸水凝胶的制备：用甲基丙烯酸酯对HA进行改性，得到MeHA，后与光引发剂反应，交联形成水凝胶；(2)采用迈克尔加成反应，接枝RGD多肽和HAV多肽于MeHA；(3)KGN封装PLGA微球的制备：将溶解的PLGA和KGN加入壳聚糖溶液中乳化成球，得到包封KGN的PLGA微球；(4)将包裹KGN的PLGA微球引入接枝RGD和HAV多肽的MeHA体系，交联成胶。本发明还公开了该制备方法所获得的产品及其应用。本发明所述的透明质酸水凝胶通过接枝RGD和HAV多肽，以及引入PLGA‑KGN微球，可以调控三维基质中hMSCs的细胞行为，且可以通过模拟新软骨形成过程中的微细胞环境，依次促进hMSCs的增殖、粘附、凝结、成软骨分化。CN113143967ACN113143967A权利要求书1/1页1.一种促进软骨形成的透明质酸水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)功能化透明质酸水凝胶的制备：用甲基丙烯酸酯对HA进行改性，得到MeHA，后与光引发剂反应，交联形成水凝胶；(2)采用迈克尔加成反应，接枝RGD多肽和HAV多肽于MeHA；(3)KGN封装PLGA微球的制备：将溶解的PLGA和KGN加入壳聚糖溶液中乳化成球，得到包封KGN的PLGA微球；(4)将包裹KGN的PLGA微球引入接枝RGD和HAV多肽的MeHA体系，交联成胶。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述功能化透明质酸水凝胶的制备包括以下步骤：将1‑2重量份的HA溶解在50‑100重量份去离子水中，滴入5‑20重量份的甲基丙烯酸酐溶液；调节反应pH至8‑9，在冰浴中反应12‑48小时；所得的MeHA溶液透析3‑5天，冻干后，‑20℃保存；将1‑2重量份MeHA溶解于50‑150重量份含光引发剂的去离子水溶液中，所得MeHA溶液在紫外光下照射，交联形成水凝胶。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述得到的MeHA溶液浓度为1wt％‑2wt％；所述紫外光为365nm，1W；所述交联时间为30‑120s。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述接枝RGD多肽和HAV多肽于MeHA包括以下步骤：将1‑5重量份的RGD/HAV多肽或者2‑10重量份RGD+HAV多肽和10‑100重量份的MeHA水凝胶溶解在三乙醇胺缓冲液中，调节溶液PH至8‑9，37℃在下反应6‑48小时，然后透析3‑5天，冻干后，‑20℃保存。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述RGD多肽、HAV多肽的肽用量浓度为50‑150mol/gHA。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述KGN封装PLGA微球的制备包括以下步骤：将1‑5重量份的PLGA，在室温下，在10‑100重量份的二氯甲烷溶液中溶解1‑3小时；1‑5重量份的KGN在10‑100重量份的丙酮中溶解；将两种溶液混合，慢慢滴入50‑200重量份的的壳聚糖溶液中，在10,000‑30,000转/分钟，冰浴中高速搅拌5‑10秒，搅拌得到乳浊液；将1‑5重量份的乳浊液滴入10‑50重量份的壳聚糖溶液中，200转/分钟‑500转/分钟搅拌6‑12小时；10,000‑15,000转/分钟，离心20‑30分钟，收集包封KGN的PLGA微球。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，离心后收集PLGA微球还包括用去离子水洗涤3‑5次，冷冻干燥保存的步骤。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述将包裹KGN的PLGA微球引入接枝RGD和HAV多肽的MeHA体系包括