用于生产蛋白质组合物的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116033921A(43)申请公布日2023.04.28(21)申请号202180057149.1(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2021.08.0611247专利代理师史文静黄革生(30)优先权数据20190136.02020.08.07EP(51)Int.Cl.A61K39/395(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2023.02.03(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2021/0720392021.08.06(87)PCT国际申请的公布数据WO2022/029306EN2022.02.10(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人R·法尔肯施泰因F·韦德金德M·伦普特M·利兹F·埃德尔曼T·格拉夫权利要求书8页说明书68页附图8页(54)发明名称用于生产蛋白质组合物的方法(57)摘要本发明一般地涉及提供用于制备蛋白质组合物的手段和方法。本发明提供了一种方法，其包括以下步骤：(i)使包含蛋白质的起始组合物与水解酶抑制剂接触，其中所述水解酶抑制剂被固定在固体载体上；(ii)回收包含所述蛋白质的组合物。另外，本发明涉及一种用于制备蛋白质制剂的方法，其包括以下步骤：(i)使包含蛋白质的起始组合物与水解酶抑制剂接触，其中所述水解酶抑制剂被固定在固体载体上；(ii)回收包含所述蛋白质的组合物，其中用于制备所述蛋白质制剂的所述方法进一步包括将表面活性剂，优选地脂肪酸酯加入到包含所述蛋白质的所述组合物。此外，本发明涉及通过本文所述的方法获得或能够获得的蛋白质组合物和/或涉及通过本文所述的方法获得或能够获得的蛋白质制剂。CN116033921ACN116033921A权利要求书1/8页1.一种方法，其包括以下步骤(i)使包含蛋白质的起始组合物与水解酶抑制剂接触，其中所述水解酶抑制剂被固定在固体载体上；(ii)回收包含所述蛋白质的组合物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法是用于制备包含蛋白质的组合物的。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中包含所述蛋白质的所述组合物与所述起始组合物相比具有降低的水解活性及/或与所述起始组合物相比具有降低的水解酶含量，例如如通过脂肪酶活性测定(针对聚山梨醇酯(LEAP)测定的脂肪酶酶促测定)和/或脂肪酸质谱(FAMS)测定所确定的。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法是用于降低所述起始组合物中的所述水解活性和/或用于降低所述起始组合物中的所述水解酶含量的。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述起始组合物进一步包含水解酶和/或具有水解活性。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中通过从所述起始组合物去除水解酶和/或通过降低所述起始组合物中的所述水解酶含量来制备蛋白质组合物。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述步骤(i)进一步包括步骤(a)将所述水解酶吸附到所述水解酶抑制剂。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中包含蛋白质的所述组合物为包含蛋白质的溶液。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述溶液为水溶液。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述溶液为经缓冲的溶液。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述水解酶为酯酶和/或酰胺酶。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述酯酶为羧酸酯水解酶和/或硫酯酶。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述羧酸酯水解酶为脂肪酶。14.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述水解酶选自由以下项组成的组：脂蛋白脂肪酶、棕榈酰蛋白硫酯酶、酸性神经酰胺酶、脂肪酸合成酶的C末端结构域、推定的磷脂酶b样2、溶酶体酸性脂肪酶和溶酶体磷脂酶。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中固定的抑制剂选自由以下项组成的组：奥利司他或双烯醇酯。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述固体载体选自由以下项组成的组：琼脂糖凝胶、聚苯乙烯和智能聚合物。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抑制剂经由叠氮基基团与炔基团的反应被固定在固体载体上。18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抑制剂经由链霉亲和素基团与生物素基团的结合被固定在固体载体上。19.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抑制剂经由氨基基团与N‑羟基琥珀酰亚胺基团的反应被固定在固体载体上。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为能够通过使包含式(1)、(2)、(3)或(4)，优选式(1)、(2)或(4)，或由式(1)、(2)、(3)或(4)，优选式(1)、(2)或(4)2CN116033921A权利要求书2/8页构成的化合物与叠氮化物反应