一种检测靶核酸的试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111073984A(43)申请公布日2020.04.28(21)申请号201911394951.0(22)申请日2019.12.30(71)申请人江苏猎阵生物科技有限公司地址226400江苏省南通市如东县掘港街道珠江路888号（如东高新技术产业开发区生命健康产业园）11号楼四层(72)发明人杨华卫吴雨萌林思琦(74)专利代理机构北京聿华联合知识产权代理有限公司11611代理人贾艳华(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/6804(2018.01)C12Q1/04(2006.01)C12R1/32(2006.01)权利要求书3页说明书9页序列表2页附图4页(54)发明名称一种检测靶核酸的试剂盒及方法(57)摘要本发明提供了一种检测靶核酸的试剂盒及方法。所述试剂盒包括试纸条、探针，以及用于特异性PCR扩增靶核酸的上游引物和下游引物；其中，上游引物用于扩增正义片段，下游引物用于扩增反义片段，上游引物或下游引物标记有第一抗原，探针标记有第二抗原；当上游引物标记有第一抗原时，探针能够与正义片段特异性配对，探针与正义片段特异性配对后得到正义配对片段；当下游引物标记有第一抗原时，探针能够与反义片段特异性配对，并探针与反义片段特异性配对后得到反义配对片段；试纸条用于检测正义配对片段或反义配对片段，试纸条上由近及远的载有第一抗原的第一抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体，第一抗体标记有信号剂。CN111073984ACN111073984A权利要求书1/3页1.一种试剂盒，其包括：试纸条、第一探针，以及用于特异性PCR扩增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物；其中，所述第一上游引物用于扩增所述靶核酸的第一正义片段，所述第一下游引物用于扩增所述靶核酸的第一反义片段，所述第一上游引物或所述第一下游引物标记有第一抗原，所述第一探针标记有第二抗原；当所述第一上游引物标记有第一抗原时，所述第一探针能够与所述第一正义片段特异性配对，并且在所述第一探针与所述第一正义片段特异性配对后得到第一正义配对片段；当所述第一下游引物标记有第一抗原时，所述第一探针能够与所述第一反义片段特异性配对，并且在所述第一探针与所述第一反义片段特异性配对后得到第一反义配对片段；所述试纸条用于检测所述第一正义配对片段或所述第一反义配对片段，所述试纸条上由近及远的载有所述第一抗原的第一抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体，所述第一抗体标记有信号剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括第二探针，和用于特异性PCR扩增质控核酸的第二上游引物和第二下游引物，其中，所述第二上游引物用于扩增所述质控核酸的第二正义片段，所述第二下游引物用于扩增所述质控核酸的第二反义片段，所述第二上游引物或所述第二下游引物标记有第一抗原，所述第二探针标记有第三抗原；当所述第二上游引物标记有所述第一抗原时，所述第二探针能够与所述第二正义片段特异性配对，并且在所述第二探针与所述第二正义片段特异性配对后得到第二正义配对片段；当所述第二下游引物标记有第一抗原时，所述第二探针能够与所述第二反义片段特异性配对，并且在所述第二探针与所述第二反义片段特异性配对后得到第二反义配对片段；所述第一抗原、第二抗原和第三抗原两两不同；所述试纸条还用于检测所述第二正义配对片段或所述第二反义配对片段；所述试纸条上还包被有在反应后形成第一质控线的第三抗原的第三抗体，且所述检测线与所述第一质控线间隔平行排列；优选地，所述质控核酸为用于监测待测样品的质量的内参质控核酸；优选地，所述试纸条上还包被有在反应后形成第二质控线的第一抗体的第四抗体，且所述第二质控线与所述检测线以及所述第一质控线分别间隔平行排列。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一探针的3’端和所述第二探针的3’端独立地修饰有ddATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP中的一种；和/或所述第一抗原、第二抗原和所述第三抗原独立地为生物素、异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、地高辛和羧基四甲基罗丹明中的至少一种，且所述FITC和FAM不同时使用；和/或所述信号剂选自胶体金、荧光化合物、化学发光化合物中的一种；优选地，所述信号剂选自胶体金、FITC和吖啶酯中的一种。4.根据权利要求1至3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括支撑底板、吸水纸、硝酸纤维素膜、金垫和样品垫；其中，所述样品垫、所述金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸依次从近端到远端固定在所述支撑底板的同一面上；所述第二抗体以及任选地第四抗体包被在所述硝酸纤维素膜上，优选地，所述第三抗体也包被在所述硝酸纤维素膜上；2CN111073984A权利要求书2/3