【精选】电镜生物样品制备技术.ppt

第五章扫描电镜生物样品制备技术第一节常规生物样品SEM制备技术FeaturesofSEMFeaturesofSEMFeaturesofSEMFeaturesofSEM材料学土聚水泥制备扫描电镜样品的总要求在不损伤样品原始结构状态的情况下保证样品的体积和表面积不发生改变充分暴露样品表面的微细结构。生物样品的特性扫描电镜生物样品要求：不含水份具有较高的二次电子发射率良好的导电性耐热性最大限度的保持样品的形貌扫描电镜样品常规制备的操作程序1.取材2.清洗3.固定4.脱水5.干燥（置换）6.粘托7.镀膜（导电处理）一、取材要点：确定观察样品的目标要求及注意事项：做好充分准备（试剂、仪器、器械等）保护观察面作好标记速度要快每次取材数量不宜过多大小要合适10×10×5毫米避免拉割、挤压二、清洗目的：去除观察面的杂质充分暴露观察面方法：物理方法:漂洗、换洗、加压冲洗、振荡超声。化学方法:用酶消化法注意事项：在保证不破坏观察面的条件下充分暴露观察面不要损伤观察面或者使样品膨胀、收缩等不要将样品裸露在空间防止样品皱缩变型清洗液的选择三、固定目的：保存样品表面的真实结构；硬化组织减少脱水干燥时水的表面张力对样品的损伤；提高样品的二次电子发射率；提高样品的耐热性和导电性。常用的固定剂：2.5%戊二醛（1～3h)1.0%四氧化锇(30’~1h)固定温度：室温一般以4℃为宜。四、脱水要求：不改变样品的体积和表面积的情况下去除样品中的水份。常用的脱水剂：乙醇、丙酮方法：梯度脱水时间：视样品大小而定注意事项：避免裸露夹伤五、干燥目的：去除样品中的脱水剂方法：空气干燥法、冷冻干燥法、叔丁醇干燥法、临界点干燥法等常用干燥法：叔丁醇干燥法、临界点干燥法空气干燥法冷冻干燥法临界点干燥法原理：利用物质在临界状态时气相与液相的界面消失样品在没有表面张力的情况下进行干燥。步骤：脱水置换（醋酸异戊酯）预冷放入样品注入液态CO2CO2置换CO2加温气化排除CO2温度：31.4度压力：73个大气压临界点干燥法Comparisonbetweencriticalpointdryingandairdrying六、粘托SEM样品在干燥处理或金属镀膜之前需用特制导电胶或双面胶将样品粘贴在金属样品台上。导电胶一般具有黏着力较强、容易挥发固化、干燥后表面电阻率低、导电性能好等特点。要点：稳钝角样品粘托Fixingthespecimen七、镀膜（样品的导电处理）目的：使样品导电增加二次电子的发射率金属镀膜技术：包括真空喷镀法和离子溅射法真空喷镀法方法：在高真空中使金属加热蒸发在样品表面沉积形成一层金属膜。缺点：金属损耗大容易产生污染和热损伤容易形成“死角”。离子溅射法原理：利用气体在低真空中的辉光放电所产生的高能离子对靶极产生撞击从靶极上打出金属粒子金属粒子在电场的作用下飞向样品。在到达样品前金属粒子之间以及金属粒子与气体分子之间要发生相互撞击改变了金属粒子飞向样品的方向具有“绕射”效应所以在样品表面能形成一层连续的、厚度均匀的金属膜。离子溅射的优点：要求的真空低