一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104628862A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.05.20(21)申请号201310553798.8(22)申请日2013.11.08(71)申请人江苏默乐生物科技有限公司地址225300江苏省泰州市海陵区药城大道1号R19楼(72)发明人徐芝勇任艳丽(74)专利代理机构泰州地益专利事务所32108代理人王楚云(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用(57)摘要本发明公开了一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用。该融合蛋白同时包含ESAT6/CFP10/TB7.7多肽序列，因而命名为融合蛋白ect。该融合蛋具有刺激人T细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的能力。应用融合蛋白ect可以检测活动性结核病和潜伏性结核感染者，并能排除卡介苗（BCG）接种者。CN104628862ACN104628862A权利要求书1/1页1.一种人结核分枝杆菌融合蛋白，其特征在于同时包含ESAT6/CFP10/TB7.7多肽序列，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种用于检测人结核分枝杆菌感染的试剂盒或试剂，包含权利要求1所述的融合蛋白。2CN104628862A说明书1/6页一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用。具体涉及一种能用于检测人结核分枝杆菌感染的融合蛋白，以及含有该融合蛋白的、用于人结核病诊断的试剂盒、试剂或药剂。背景技术[0002]目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病人数的14.3％，位居世界第2位，结核分枝杆菌感染率高，人感染结核分枝杆菌后，大部分会成为无症状的潜伏性结核感染者（LatentTuberculosisInfection,LTBI）。然而当机体免疫力降低时，则会导致结核分枝杆菌大量增殖，引发临床疾病。尽早发现结核分枝杆菌感染是预防与控制结核病传播的重要手段之一。[0003]结核菌素皮肤试验(TST)是判断机体是否感染过结核分枝杆菌的主要手段，但由于旧结核菌素或结核菌素蛋白衍生物(PPD)含有卡介苗菌苗株(BCG)和其他分支杆菌共有的多种抗原成分，特异性低，不能区分结核分枝杆菌自然感染和卡介苗接种后效应，在鉴别结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌感染方面存在局限性。[0004]近年来研究发现应用6KD早期分泌抗原靶分子(earlysecretayantigenictarget6，ESAT-6)和10KD培养滤过蛋白(culturefiltrateprotein,10,CFP-10)及肽段为抗原的血清学T细胞γ-干扰素(IFN-γ)释放试验（interferongammareleaseassays,IGRAs）在诊断结核分枝杆菌感染方面具有良好的敏感性和特异性，被用来快速诊断结核感染，对于控制结核病流行具有重要意义。目前IGRAs已经开始在英、美、日本等国用于活动性结核病和潜伏性结核感染者的诊断，HIV合并结核感染的检测，区别结核感染者与BCG接种以及耐药结核菌感染的快速检测等。[0005]20世纪90年代末，学者们将结核分枝杆菌基因组与卡介苗（BCG）的基因序列进行比较，发现了一个仅存在于致病性分枝杆菌包括人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌及某些非典型分枝杆菌，但不存在于BCG及其他非致病性分枝杆菌中的RD1区。RD1区同一操纵子中的开放读码框（ORFs）Rv3875、Rv3874分别编码的分泌性蛋白早期分泌抗原靶分子6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）都是从短期培养的滤液中分离的低分子量蛋白质（分子量分别为6kd和10kd），具有良好的免疫原性。应用ESAT-6和CFP-10等RD1区域编码蛋白作为特异性抗原进行的以T淋巴细胞为基础体外检测IFN-γ释放的方法，逐渐成为结核病早期诊断方面研究的热点。TB7.7是结核分枝杆菌基因组差异区13（RDl3）基因编码的结核杆菌特异性抗原。基因开放阅读框长度246bp，多肽序列81个氨基酸残基。ESAT6、CFP10和TB7.7这3种抗原在BCG和绝大部分环境分枝杆菌中都缺失（除堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌和苏加分枝杆菌外），因此避免了与卡介苗和大多数非结核分枝杆菌抗原的交叉反应。发明内容3CN104628862A说明书2/6页[0006]本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中的不足，提供一种人结核分枝杆菌融合蛋白及其应用。为此，本发明的解决方案是：[0007]提出一种人结核分枝杆菌融合蛋白，同时包含ESAT6/CFP10/TB7.7多肽序列，氨